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重组质粒构建流程
1.基因的获得: shRNA寡核苷酸序列的设计和合成(将正确序列克隆入载体中,退火形成双链,PCR扩增)
2.回收
回收试剂盒
3.连接
4. 转化
5.抽提质粒(碱裂解法提取质粒DNA)
6.重组质粒克隆的鉴定
1)通过PCR方法鉴定:以重组质粒为模板,PCR产物的特异性引物或载体的通用引物进行PCR扩增后电泳鉴定。
2)酶切鉴定:双酶切鉴定时只要出现质粒条带和你的插入片段的目的条带就行了
7. 质粒DNA的含量及纯度鉴定
8.浓度测定仪及琼脂糖凝胶检测
来自: 生物学渣 > 《载体/质粒》
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