【原】怎样选择(设计)测序用引物?

测序用引物要求非常严格，不同于PCR用引物。PCR用引物一般只要能和模板结合，3' 端的几个碱基能完全配对，即使引物长达80~100多个碱基，只要调整PCR反应条件，也能成功进行PCR反应。

而测序用引物便不一样了，必须严格符合以下要求。本公司的测序用引物全用引物设计软件Oligo设计。在本公司测序时，我们可免费帮助设计测序用引物。。

●长度在15~25个碱基左右，一般选择20个碱基(根据GC含量做适当调整)，3' 端尽量选择G或C碱基 (但不绝对)，以增加与模板的结合能力。

●Tm温度应选择50℃~70℃左右。

●GC含量应选择在50%左右，尽量避开A、T、G、C的连续结构。

●避开引物自身形成发夹结构或引物二聚体结构等复杂结构。

●保证引物和模板100%匹配，特别是3'端的几个碱基一定要100%匹配。同时必须严格保证引物和模板之间只能有一个结合位点。