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君安医学细胞平台长期致力于细胞形态学检验的发展，为进一步推广浆膜腔积液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液细胞形态学检查，使其操作规范化、标准化，经全国多位从事该领域研究的专家共同商讨，根据国内实验室发展情况，并参考国内外大量文献，制定出浆膜腔积液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液细胞形态学检验与诊断技术专家共识。该共识由君安医学细胞平台独家发布，不足之处，敬请指正。 脑脊液细胞形态学检验专家共识（2020版） 脑脊液是充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的一种无色透明体。脑脊液细胞形态学检验对中枢神经系统感染性疾病、脑膜癌病、中枢神经系统白血病、中枢神经系统淋巴瘤及脑血管病等疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后评估等有重要的参考价值。为进一步推广脑脊液细胞形态学检验，使其操作规范化、标准化，经国内多位从事该领域研究的君安医学细胞平台专家共同商讨，制定出脑脊液细胞形态学检验专家共识。 一、具体内容 01 检验目的 检查患者脑脊液中各种细胞数量、形态和比例的变化，分析脑脊液细胞学反应类型，结合患者临床表现、影像检查和实验室相关检查结果等综合分析，做出细胞学诊断,为中枢神经系统疾病的诊断、鉴别诊断、治疗效果和预后评估提供检验诊断依据。 02 标本采集 脑脊液标本主要通过腰椎穿刺术获得。为避免或减少血液混入对脑脊液细胞计数及分类造成的影响，一般采用第三管脑脊液用于细胞计数及细胞形态学检查，标本量不少于2ml为宜。推荐使用腰穿包内带盖的无菌塑料试管作为采集容器，避免使用真空采血试管或痰杯等容器送检。 03 标本送检 原则上，脑脊液标本采集后应立即送检，一般不超过1h，室温保存。如标本不能及时送检，可置4～8℃冰箱暂时保存，2h内送检。 04 标本接收 标本送达检验科后，工作人员核对标本相关信息，检查采集容器是否符合要求，是否有渗漏，标本量是否足够。标本接收后应及时进行检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类；对于部分不合格标本(如标本容器选择错误、标本量小于1ml、送检不及时等情况），可执行让步接收和让步检验，及时与临床进行沟通，并在报告单上中备注说明标本状况对检验结果的影响。 05 检验程序 5.1 理学检查 包括脑脊液外观、透明度、球蛋白定性等。 5.2 细胞计数 包括细胞总数、有核细胞计数及红细胞计数等，计数结果以×106/L 单位报告。 5.3 制片 推荐采用细胞玻片离心法进行细胞及其他有形成分的收集。每次制片取混匀后的脑脊液约500微升（细胞数较多时，可适当减少用量），离心速度800rpm，离心时间8～10min。试管离心沉淀后取沉淀物涂片的方法不适用于脑脊液细胞学检查。 5.4 染色 瑞-吉染色为脑脊液细胞形态学检验的常规染色方法，必要时加做其它染色法，如墨汁染色、革兰氏染色、抗酸染色、普鲁士蓝染色等。 5.5 阅片 低倍镜下快速浏览全片，结合常规细胞计数结果，判断涂片细胞收集效果是否满意。如收集效果不满意，应重新制片。低倍镜下观察有无异常细胞或病原成分，发现异常成分时转油镜下进一步确认和识别。 5.6 细胞分类 在油镜下进行有核细胞分类，结果以百分比形式表示。如全片有核细胞数不足50个，可以“全片可见有核细胞多少个，其中**细胞多少个”的形式进行描述。 06 报告 细胞学报告推荐采用图文报告形式，内容包括常规、细胞学和实验室提示三部分。 6.1 常规部分 包括颜色、透明度、球蛋白定性、细胞总数、有核细胞计数、红细胞计数及有核细胞分类等。 6.2 细胞学部分 包括图像和形态学描述。用图像采集系统在镜下选择2～4幅有代表性的图片进行报告。对细胞学表现进行必要的形态描述，包括细胞分布、细胞大小、胞核大小、核形、核染色质特点、核仁大小与数量、胞质颜色及内容物等。同时报告其他异常成分，如细菌、真菌及菌丝、寄生虫、结晶等。 6.3 实验室提示 根据细胞学表现，结合患者临床表现、影像检查及实验室检查相关结果综合分析，向临床提供合理性提示和建议。 07 涂片保存 报告发出后，对涂片进行分类归档，妥善保管，保存时限按各实验室标准操作规程进行处置，一般保存3～5年。 08 生物安全防护 8.1 标本的采集、运送必须符合生物安全要求，防止溢出。如标本溢出后，应立即对污染的环境和设备进行消毒处理。 8.2 检验人员在处理标本时，需做好个人防护，严格执行生物安全管理程序，对有明确传染性的标本按级别进行防护。 8.3 废弃标本及其它相关的废弃物，严格执行医疗废物处理流程。 09 临床意义 9.1 常见细胞及临床意义 9.1.1 红细胞 正常脑脊液中不存在红细胞。脑脊液中出现红细胞，见于各种原因引起的出血，如脑出血（病理性）、蛛网膜下腔出血（病理性）及腰穿损伤出血（非病理性）等。 9.1.2 淋巴细胞 正常脑脊液中有少量的淋巴细胞，约占有核细胞总数的60%～70%。受抗原刺激后，淋巴细胞形态和功能可发生改变，按形态学分为小淋巴细胞、大淋巴细胞、激活淋巴细胞等。 9.1.3 浆细胞 正常脑脊液中不存在浆细胞。浆细胞的出现，提示体液免疫反应的存在。 9.1.4 单核细胞 正常脑脊液中有少量的单核细胞，形态与外周血中单核细胞相似，约占有核细胞总数的30%～40%，与淋巴细胞的比例为4∶6或3∶7。疾病状态下，单核细胞受到抗原或各种理化因素的刺激时，形态会发生变化，表现为胞体、胞核增大，胞膜不规整，可有瘤状突起，胞质着色加深，胞质出现多个空泡，称为激活单核细胞。 9.1.5 中性粒细胞 正常脑脊液中不存在中性粒细胞，但外周血中的中性粒细胞可因腰椎穿刺损伤随红细胞带入，应予识别。中性粒细胞的出现提示机体存在炎症反应，常见于各种中枢神经系统感染，无诊断特异性；也可见于颅脑外伤、颅脑术后、肿瘤、脑出血、蛛网膜下腔出血等。 9.1.6 嗜酸性粒细胞 正常脑脊液中不存在嗜酸性粒细胞。嗜酸性粒细胞的数量或比例明显增多时，提示机体存在过敏反应或寄生虫感染的可能。 9.1.7 嗜碱性粒细胞 正常脑脊液中不存在嗜碱性粒细胞，它的出现提示存在过敏反应，可见于各种炎症、异物反应、寄生虫感染等，无诊断特异性。 9.1.8 吞噬细胞 正常脑脊液中不存在吞噬细胞。红细胞吞噬细胞、含铁血黄素吞噬细胞及胆红素吞噬细胞的出现提示陈旧性出血。吞噬细胞吞噬功能强大，可吞噬各种异物，包括变性的白细胞、吞噬细胞和病原体等。 9.1.9 脱落细胞 各种原因导致脑室中的室管膜细胞、脉络丛细胞及蛛网膜下腔中的蛛网膜细胞脱落时，可在脑脊液中偶然发现，无诊断特异性。 9.1.10 肿瘤细胞 脑脊液中的肿瘤细胞来源于中枢神经系统原发性肿瘤和继发性肿瘤。前者可见于恶性程度较高的髓母细胞瘤、胶质瘤、生殖细胞瘤、室管膜瘤和脑膜瘤等；后者常见于肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、胃癌、白血病及淋巴瘤等向中枢神经系统转移。 9.2 常见细胞学表现及临床意义 9.2.1 正常脑脊液细胞学表现 外观呈无色透明，白细胞数不高于5╳106/L，由淋巴细胞和单核细胞组成，两者比值为7∶3或6∶4，细胞形态规整，无明显的细胞激活表现。 9.2.2 淋巴细胞反应型 有核细胞计数可正常或显著升高，镜下可见淋巴细胞比例明显增多，可见激活淋巴细胞、浆细胞及少量单核细胞和中性粒细胞等。临床意义：常见于病毒性脑膜炎，也可见于其它中枢神经系统感染性疾病、免疫性疾病和肿瘤。 9.2.3 中性粒细胞反应型 有核细胞数中度至显著升高，镜下可见大量的中性粒细胞，可伴少量淋巴细胞、单核细胞或浆细胞，有时可见病原菌。临床意义：提示急性炎性反应，见于细菌性脑膜炎、结核性脑膜炎渗出期，也可见于脑出血、蛛网膜下腔出血及颅脑手术后等非急性炎性反应。 9.2.4 嗜酸性粒细胞-浆细胞反应型 有核细胞数可正常或轻中度升高，镜下可见嗜酸性粒细胞和浆细胞比例明显升高，常伴少量淋巴细胞和单核细胞等。临床意义：常见于脑寄生虫感染，也可见于结核性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎、颅脑手术后及蛛网膜下腔出血病患者。 9.2.5 淋巴-单核细胞反应型 有核细胞数基本正常或轻度增高，镜下可见少量淋巴细胞、单核细胞，部分淋巴及单核细胞可见激活表现。临床意义：多见于疾病的恢复期，需与先前的细胞学表现进行比较分析。 9.2.6 淋巴-中性粒细胞反应型 有核细胞数中度至显著升高，镜下可见中性粒细胞及淋巴细胞明显增多，偶见单核细胞或浆细胞等。临床意义：提示炎性反应。多见于中枢神经系统细菌感染治疗后、结核性脑膜炎、真菌感染和颅脑术后等，需结合病史、患者临床症状及体征和实验室相关检查结果综合考虑。 9.2.7 混合细胞反应型 有核细胞数中度至显著升高，镜下可见中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等多种细胞同时存在，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，也可伴少量浆细胞、嗜酸性粒细胞的出现。临床意义：提示炎性反应，与淋巴-中性粒细胞反应型临床意义基本一致。多见于中枢神经系统细菌感染治疗后、结核性脑膜炎、真菌感染和颅脑术后等，需结合病史、患者临床症状及体征和实验室相关检查结果综合考虑。部分结核性脑膜炎患者抗结核治疗后，在相当长一段时间内细胞学可表现为混合细胞反应型，这一特点对诊断结核性脑膜炎具有一定的参考价值。 10 参考文献 10.1 粟秀初，孔繁元.神经系统临床脑脊液细胞学.北京：人民军医出片社，2001. 10.2 何俊瑛，孔繁元，郭力.临床脑脊液细胞学.石家庄：河北科学技术出版社，2007. 10.3 尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第4版，北京：人民卫生出版社，2015. 10.4 张国军.脑脊液临床实验室检查策略.北京：人民卫生出版社，2018. 10.5 WS/T 662-2020 临床体液检验技术要求 10.6 龚道元，张时民，黄道连.临床基础检验形态学.北京：人民卫生出版社，2019. 10.7 吴茅.浆膜积液细胞图谱新解及病例分析.北京：人民卫生出版社，2018. 10.8 张纪云，龚道元.临床检验基础（第五版）.北京：人民卫生出版社，2019. 10.9 王建中，张时民，刘贵建，等.临床检验诊断学图谱.北京：人民卫生出版社，2012. 10.10 彭明婷.临床血液与体液检验.北京:人民卫生出版社，2017. 二、专家组成员（按姓氏拼音顺序排序） 柏世玉（山东省泰安市中心医院） 曹 科（深圳市儿童医院） 窦心灵（酒泉市人民医院） 丁邦胜（中科大一附院（安徽省立医院）） 段爱军（河南信合医院） 樊爱琳（附属西） 高菊兴（ 临沂市人民医院） 顾剑飞（复旦大学附属华山医院） 高建军（河北邯郸市第一医院） 高海燕（哈尔滨医科大学附属第二医院） 黄道连（南方医科大学附属中山市博爱医院） 何 勇（湖南保靖县人民医院） 黄 俊（成都市第三人民医院-临床医学检验部） 胡 晶（重庆医科大学检验医学院） 蒋锦文（浙江省东阳市人民医院） 金鑫（浙江省立同德医院） 卢兴国（浙江大学附属第二医院） 李相磊（开封市中心医院） 刘超群（金华市中医医院） 梁 勤（甘肃省中医院） 林慧君（浙江省人民医院） 缪 峰（原山东省寄生虫病防治研究所） 潘 巍（海盐县人民医院） 茹进伟（乐昌市人民医院） 孙宏华（中山大学附属第七医院（深圳）） 吴 茅（浙江省人民医院） 王敏敏（杭州市第一人民医院） 王哲（河北省保定第一医院） 许绍强（广东三九脑科医院） 夏万宝（上海市松江区中心医院） 邢铭芬（湖州市南浔区人民医院） 许银怀（河南省濮阳市疾病预防控制中心） 岳保红（郑州大学第一附属医院、郑州大学医学检验系） 闫立志（内蒙古包钢医院） 张时民（北京协和医院） 张建富（江苏省人民医院，南京医科大学第一附属医院） 曾强武（贵州中医药大学第一附属医院） 赵成艳（大连医科大学附属第二医院） 朱凤娇（浙大一院三门湾分院） 庄顺红（浙江省金华市中心医院） 周道银（上海长海医院） 周玉利（杭州市第一人民医院） 郑智弦（梧州市红十字会医院） 周麟（诸暨市中医医院） 郑 瑞（浙江省台州医院） 三、执笔：闫立志 四、主审：许绍强 周道银 吴茅 张时民 黄道连 樊爱琳 段爱军 五、定稿会 江苏南京，2020年7月17～19日
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