【原】腺病毒的包装系统是什么？

腺病毒包装系统按照重组方式主要分为两种，一种在细菌（BJ5183）中重组，为AdEasy^TM腺病毒重组系统，另外一种在QBI-293A细胞中重组，为AdMax腺病毒重组系统。

一、 AdEasyTM腺病毒重组系统

AdEasyTM腺病毒重组系统1998年由He Tong Chuan等改造的一种非常简单易用的双质粒系统，腺病毒基因组质粒pAdEasy-1和转移质粒pShuttle-CMV，pAdEasy-1质粒是Ad5腺病毒基因组，其中删除了E1基因（1-3533bp）和E3基因（28130-30830bp），

E1基因的功能区在293A细胞中得到补充；pShuttle-CMV质粒包含目的基因插入位点、Ad5基因组左右同源臂、Ad5末端重复序列（ITR）、包装信号序列、PacI双酶切位点和卡那霉素抗性。

第一步：将目的基因cDNA插入转移质粒pShuttle-CMV；

第二步：将得到的质粒用PmeI或ECORI内切酶线性化；

第三步：pShuttle-CMV和pAdEasy-1共同转化大肠杆菌BJ5183，双质粒在BJ5183中发生重组，卡那霉素筛选重组子，并酶切鉴定。因为BJ5183有recA重组酶活性但同时又缺失介导细菌本身基因组重组的酶，可以用于质粒重组和转化，得到候选重组子；

第四步：将酶切鉴定正确的重组子转化DH5a感受态，在DH5a中扩大培养，质粒提取，鉴定，PacI酶切线性化，暴露其反向末端重复序列（ITR）。

第五步：线性化质粒回收后转染293A细胞，产生重组病毒颗粒，收毒，后续纯化浓缩。

另外，也可以采用单质粒两步法重组，即将AdEasy转入感受态细胞BJ5183中，再将pADEasy-BJ5183制备成感受态细胞，将构建好的穿梭质粒pShuttle-CMV用PmeI线性化后直接转化pADEasy-BJ5183感受态细胞，卡那霉素筛选重组子，并酶切鉴定，线性化后转染293A细胞。