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1，缺乏染色 下图样本是正常人肝血管组织，目标蛋白是α-平滑机动蛋白，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，在红圈处并没有检测到抗原。 
可能原因 | 解决办法 | 缺乏抗原 | 做Western blot检测目标蛋白是否有表达或原位杂交检测mRNA是否有表达 | 抗体无效 | 避免反复冻融；用阳性片子进行检测 | 抗原修复无效 | 改进抗原修复方法 | 抗原-抗体结合不足 | 加大一抗浓度，增加孵育时间 | 抗体不能穿过细胞 | 加Triton x-100到封闭液中，通透组织 |
2，高背景 下图样本是小鼠皮下移植瘤组织，目标蛋白LYVE1，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，B图背景高。 
可能原因 | 解决办法 | 脱蜡不足 | 适当延长二甲苯浸泡次数和时间 | 干片，组织过于干燥 | 避免干片 | 抗原修复过度 | 减少修复时间 | 内源性酶干扰 | 添加淬灭操作 | Fc受体干扰 | 用二抗来源的血清取代BSA封闭 | 抗体浓度过高 | 适当增加稀释比例 | 染色时间过长 | 镜检观察显色，合适的时候终止显色 |
3，染色不正确 下图样本是人小肠粘膜组织，目标蛋白IL-10，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，在与A图相同位置的B图中没有检测到抗原，反而在组织边缘检测到组织表达。  可能原因 | 解决办法 | 通透作用破坏了膜 | 去除缓冲液中的通透剂 | 固定的方法对抗原不合适 | 尝试不同的固定剂，关于固定剂的使用选择见补充材料 | 没有及时固定引起抗原扩散 | 取材后立即固定 |
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