高置信度的测序选对建库试剂 — 避免错误，获取可靠NGS数据

刘得光3p6n6zqq 2021-09-25

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Twist 文库制备酶切片段化试剂盒 2.0

从最棘手的样本中获取高置信的NGS数据，需要在测序过程中使用更好的试剂。了解Twist Bioscience最新推出的文库制备酶切试剂盒2.0，如何帮您实现更高质量的文库制备，获得可靠的测序结果。

增强型酶切片段化

Twist 文库制备酶切片段化 (EF) 试剂盒 2.0 旨在帮助您实现更高效的测序流程，获得更准确的新一代测序 (NGS) 结果。与原来的 Twist 文库制备 EF 试剂盒 1.0 相比，2.0 具备诸多优势。除了全新的片段化和连接模块以外，升级后的试剂盒还包含 Equinox 文库制备扩增预混液。这种热启动酶制剂在低起始量下具有更低的错误率和更高的效率，使其成为需要高效率、高产量的样本（如 FFPE）的理想选择。

该试剂盒的精简工作流程将文库制备步骤合并为一个单管反应，再加上低嵌合体率和 Twist 高度均一的靶向富集工作流程，确保您实现更高质量的文库制备，获得可靠的测序结果。

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主要优点

文库制备工作流程

Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 包含末端修复、加 dA 尾、接头连接和文库扩增所需的试剂。此外，还包括用于 gDNA 样本片段化的酶，可以用于调节插入片段大小。在核心文库构建完成后，可使用全长或通用接头满足您的应用需求。

中靶率一致

Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 的中靶率与 Twist 文库制备 EF 试剂盒 1.0 相当。右图比较了不同杂交条件下的中靶片段比例。

使用 Twist 核心外显子组组合和 Twist 通用接头系统进行靶向富集。在 NextSeq® 550 或 2000 平台上进行测序。将数据降至 150x 的靶向覆盖深度，并使用 Picard Metrics 进行分析。误差线表示重复分析的标准偏差。

降低嵌合体率，减少测序错误

在文库制备过程中，尽可能避免不适当的 DNA 连接或重组，能够大幅减少嵌合体导致的测序错误。右图可以看出，与 Twist 文库制备 EF 试剂盒 1.0 相比，升级后的 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 的嵌合体测序片段比例显著减少。2.0 的嵌合体比例与采用机械片段化的文库制备相当。

NGS 文库通过 Twist 酶切片段化文库制备试剂盒 1.0、Twist 酶切片段化文库制备试剂盒 2.0 或 Twist 机械片段化文库制备试剂盒得到。使用 Twist 核心外显子组组合和 Twist 通用接头系统进行靶向富集。采用 NextSeq® 2000 平台进行测序。将数据降至 150x 的靶向覆盖深度，并展示Picard metric PCT_CHIMERAS 数据。误差线表示重复分析的标准偏差。

始终如一的性能

稳定的性能确保可靠的结果。当实验条件不变时，Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 能够生成可靠、一致的 DNA 文库片段大小。右图为使用该试剂盒生成的 8 个 NGS 文库的电泳图。荧光曲线的高度重叠表明，每次运行都能实现一致的文库制备。

NGS 文库是使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 和 Twist 通用接头系统生成的。37°C 下对 50 ng 高质量 gDNA 进行 20 分钟的片段化。使用 6 个 PCR 循环进行扩增。使用 Agilent DNA 7500 分析试剂盒进行样本分析，并使用 Expert 2100 软件进行数据叠加。

调整片段大小，满足您的实验需求

使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0，只需调整片段化时间即可根据您的特定要求调整 DNA 文库片段大小。右图为 4 种片段化时间下获得的 NGS 文库的电泳图。

NGS 文库是使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 和 Twist 通用接头系统生成的。37°C 下对 50 ng 高质量 gDNA 进行不同时长的片段化。使用 6 个 PCR 循环进行扩增。使用 Agilent DNA 7500 分析试剂盒进行样本分析，并使用Expert 2100 软件进行数据叠加。

改进文库扩增，大幅减少测序错误

扩增过程中出现错误不可避免，但我们需要尽量减少这些错误。升级后的 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 中包含 Equinox 反应预混液，其中含有高保真热启动酶。与之前推荐以及常用的聚合酶相比，Equinox 反应预混液的错误率更低、碱基错配更少。这意味着可以实现更准确的扩增，最终获得更可靠的测序数据。

采用专有的 NGS 分析方法来检测大量错配碱基对中的碱基错配事件。给出的数值代表所有错配事件的平均错误率。