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作者 小太阳陪伴向日葵 一：基础知识： 1 基因工程的关键技术是基因表达载体的构建，该步骤的三个工具是限制酶，DNA 连接酶和运载体。 2E-coliDNA 连接酶只连接黏性末端，T4DNA 连接酶连接平末端和黏性末端。 3限制酶的识别序列不同但可以切除相同的黏性末端；相同的黏性末端可以是不同的限制酶所切。 4仅用一种限制酶会使目的基因自身环化，因此一般要用 2种限制酶切割，目的是：防止质粒和含目的基因的外源 DNA片段自身环化，也可防止目的基因与质粒反向连接。 5PCR 技术：
二典例分析： 题型一：电泳问题 解决此类问题需牢记一个原则：电泳图只能显示降解产物中 DNA 片段的种类，而不能显示每种片段的个数是多少。
1： 答案：C（此题较简单，可利用排除法解决。此题可帮助同学们理解电泳的概念。） 2： 答案：2 解析：根据 420+280=700，200=100×2 可简单画出该 DNA 分子片段与两种限制酶的关系图： 题型二：重组质粒中的计算问题（重难点） 此类问题一般较为复杂，需要花费一定时间。解题关键是头脑保持清醒，有清晰的思路和 一定的计算能力。
3： 答案： 题型三：PCR 技术中的计算问题（重难点） 此类计算问题具有一定的难度，需要通过画图等方法加以计算，不可投机取巧，钻空偷懒。 4：
答案：D
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