内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法

内切酶EcoRI, 无动物源性背景：

经过基因工程改造的EcoRI，ADCF，能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI，ADCF具有以下特点：在5到15分钟内快速消化，极好的酶活性冗余，易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分

内切酶EcoRI, 无动物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

内切酶EcoRI, 无动物源性组成：

单位定义：

一个单位定义为在37°C、50µL推荐反应缓冲液中1小时内消化1µgλDNA所需的EcoRI量

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制

净化

SDS-PAGE检测结果大于95%。

核酸内切酶残基

将20U的EcoRI与超螺旋质粒DNA在37°C下孵育4小时，DNA电泳中未检测到质粒的变化。

蓝/白筛选试验：

用1μl EcoRI消化含有locZa基因的合适载体。将消化产物连接并转化到大肠杆菌感受态细胞中。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功门控的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断的基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。ADCF限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

DNA酶残基

将20U的EcoRI与双链DNA在37°C下孵育16h，DNA电泳未检测到DNA的变化。

RNase残基

将20U的EcoRI与RNA在37℃下孵育1小时，电泳中未检测到RNA降解

结扎和清算

在最佳反应温度下用20U的EcoRI消化后，DNA片段可以在22°C下与T4 DNA连接酶（Fast）连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，大多数片段可以用EcoRl重新切割。

宿主DNA残基：

通过对大肠杆菌16S rDNA特异性的TaqMan-qPCR检测酶溶液中的核酸残基，检测到少于10pg的大肠杆菌基因组残基。

宿主蛋白残留：

通过ELISA测定大肠杆菌宿主蛋白低于50ppm。

无菌：

未检测到大肠杆菌。

内毒素残留量：

<10 EU/mg