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欲做测序，先需建库。 建库，即文库制备，是指将样本处理成可被测序仪读取的DNA片段，该片段需满足一定的长度，且在两端都连接了指定的序列（锚定序列、测序引物序列、标签序列等）。 目前市面上尚未有成熟的建库自动工作站，因此建库工作基本都靠实验室人员手工操作，建库结果取决于采用的实验方案、试剂种类、熟练程度等诸多因素影响。可以毫不夸张的说，建库工作量占了整个高通量测序实验中工作量的80%，其结果直接决定了测序下机数据的好坏。 下面笔者对三种主要的建库方法（机器打断法，转座酶法，扩增法），分别进行介绍： 机器打断法，是指利用超声波将DNA破碎值一定的长度后，再通过连接酶，在DNA两侧添加接头。 对硬件依赖性： 高 一颗星 * 采用这种策略建库必须配备超声波打断仪，目前 市面上主流产品为Covaris的S220和M220。 配件和试剂成本： 高 一颗星 * 打断管，末端修复，连接酶等，市面上成熟的试剂盒较多。 每个样本建库试剂成本约需300元。 稳定性： 高 五颗星 ***** 准确性： 无GC偏好 五颗星***** 起始量： 要求起始量高 一颗星 * 全长> 50kb，浓度 20-35ng/ul，体积 130ul，A260/A280=1.8-2.0 适用性： 可适用于各种类型的建库，最常用于全基因组测 序，例如细菌基因组测序。 |
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