【原】优宁维转染 全攻略

转染——是指将外源基因如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。

目前常见的细胞转染方法有以下几种：
1、化学介导法：
（1）阳离子脂质体：脂质体是一种人工的脂双层膜。可以将DNA包裹到亲水性核心内部，也可将其络合到磷脂片层。

热卖产品：

货号	名称	规格	应用
T-2001-01	DharmaFECT 1 Transfection Reagent	0.2 mL	设计，适用于绝大部分细胞系
T-2002/3/4-01	DharmaFECT 2, 3, 4 Transfection Reagent	0.2 mL	利用不同配方满足更多细胞系的小片段RNA高效转染要求
T-2010-01	DharmaFECT Duo Transfection Reagent	0.2 mL	专为siRNA和质粒的共转染设计，且细胞毒性低、转染效率高
T-2006-01	DharmaFECT kb DNA transfection reagent	1 mL	专为质粒转染设计，且细胞毒性低、转染效率高
sc-395739	Ultracruz® Transfection Reagent	0.2 mL	具有高效的DNA转染效率，推荐用于CRISPR/Cas9 KO质粒，HDR质粒，Cre 载体，双切口酶质粒和CRISPR/dCas9激活质粒
sc-29528	siRNA Transfection Reagent	0.2 mL	具有高效的DNA转染效率，推荐用于CRISPR/Cas9 KO质粒，HDR质粒，Cre 载体，双切口酶质粒和CRISPR/dCas9激活质粒
sc-108061	Plasmid Transfection Reagent	0.2 mL	推荐用于shRNA质粒转染

（2）阳离子聚合物：带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。阳离子聚合物和阳离子脂质体最大的区别在于阳离子聚合物不含疏水部分而完全溶于水，可以方便地进行化学修饰，且不会像脂质体一样破坏细胞结构，所以相对毒性较低。

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货号	名称	规格	应用
101-10N	jetPEI®	1mL transfection reagent + 50 mL NaCl 150mM solution	DNA高通量筛选转染试剂
102-05N	jetPEI®-Hepatocyte	0.5 mL transfection reagent + 50 mL NaCl 150mM solution	DNA干细胞转染试剂
103-05N	jetPEI®-Macrophage	0.5 mL transfection reagent + 50 mL NaCl 150mM solution	DNA巨噬细胞转染试剂
114-15	jetPRIME®	1.5 mL transfection reagent + 2 x 60mL of jetPRIME® buffer	通用型DNA/siRNA转染试剂
117-15	jetOPTIMUS®	1.5 mL transfection reagent + 4x60mL jetOPTIMUS® Buffer	最佳DNA转染试剂，在难转染细胞上获得最大基因表达
150-01	jetMESSENGER®	0.1 mL transfection reagent + 10 mL mRNA Buffer	mRNA转染试剂，针对难转染细胞
409-10	INTERFERin®	1 mL transfection reagent	siRNA/miRNA转染专用试剂
116-001	FectoPRO®	1 mL transfection reagent + 1 mL FectoPRO® Booster	蛋白和抗体生产专用，瞬时基因表达实现卓越的蛋白产量，适用于各种哺乳细胞表达体系，DNA用量更少，更经济高效10 mL transfection reagent + 10 mL FectoPRO® Booster
120-001	FectoVIR®-AAV	1 mL transfection reagent	针对悬浮系统生产rAAV设计开发，高效灵活易放大，基因和细胞治疗领域的No.1
115-0015	PEIpro®	1.5 mL transfection reagent	病毒（LV/AAV/VLPs）生产的金标准，全球唯一完全GMP产品，悬浮和贴壁体系均适用，且有残留检测方法
301105	PolyFect Transfection Reagent	1 mL，6孔板，50-100次，              25-65次600mm皿	DNA, COS-7, NIH/3T3, Hela, 293, CHO五大细胞系

（3）非脂质体的脂质（Non-liposomal lipids）：脂质体技术的未来发展方向——革新配方成分形成胶束结构而非简单的双层膜结构，令核酸传递更有效率而且细胞毒性也显著降低。能够转染各种贴壁细胞，也可用于悬浮细胞，毒性较阳离子脂质体更小。

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货号	名称	规格	应用
301005	Attractene Transfection Reagent	1 mL，24孔板，666次	DNA，DNA和siRNA或miRNA模拟物/抑制剂
301425	Effectene Transfection Reagent	1 mL，12孔板，160次	DNA,原代细胞和敏感细胞
301105	HiPerFect Transfection Reagent	1 mL，6孔板，50-100次，25-65次600mm皿	siRNA和miRNA模拟物或抑制剂，贴壁细胞、肿瘤细胞、原代细胞、悬浮细胞和巨噬细胞

2、物理介导法：
电转染：也叫细胞电穿孔 (electroporation)，在瞬间强大电场的作用下，溶液中细胞的细胞膜被破坏，通透性增高，带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜。电场使DNA等物质进入细胞膜后只能停止在细胞膜附近，随后细胞本身的机制可以允许这些物质到细胞核等处。传统转染方式很难转染原代细胞，这种情况下电转染就能够从根本上解决此问题，无论是原代细胞、干细胞、还是难转染细胞系，都可以重复出很高的转染效率。
 
Lonza Nucleofection™技术
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Lonza电转仪：

名称	货号	备注
Nucleofector™ 2b Device	AAB-1001	2b平台，低通量有效转染难以转染的细胞系和原代细胞，150+种优化方案使用广泛
4D-Nucleofector™ Core Unit	AAF-1002B	4D核心元件
4D-Nucleofector™ X Unit	AAF-1002X	4D X模块，各种细胞核转染含20ul电板条或100ul电极杯
4D-Nucleofector™ Y Unit	AAF-1002Y	4D Y模块，适用于贴壁原代细胞，尤其是神经元

爆款电转试剂盒：

名称	货号	适用仪器	适用细胞
P3 Primary Cell 4D X Kit L	V4XP-3024	4D-Nucleofector™系统X模块（100ul电极杯）	原代细胞如人T细胞，CD34或大鼠神经元等
SF Cell Line 4D X Kit L (24 RCT)	V4XC-2024	4D-Nucleofector™系统X模块（100ul电极杯）	难以转染的细胞系，如K-562，Neuro-2A或RAW264.7
Human T Cell Nucleofector® Kit	VPA-1002	Nucleofector™ 2b平台	原代人T细胞
Cell Line Nucleofector® Kit V	VCA-1003	Nucleofector™ 2b平台	HepG2，HL-60，Jurkat，K-562，MCF7，SH-SY5Y或THP-1等细胞系

3、生物介导法：
病毒介导法：对于上述几种方式都不能实现转染的细胞，可采用病毒转染。病毒介导法转染效率特别高，尤其是针对难以转染的原代细胞、活体细胞。病毒转染主要包括以下几个步骤：构建载体、包装提纯病毒以及感染靶细胞

 
慢病毒包装、转染过程

目前，腺病毒、逆转录病毒和慢病毒载体已广泛用于哺乳动物细胞体内外的转染实验中。以慢病毒为例，其包装系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装细胞，即可在细胞上清中收获携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒。包装好的假病毒颗粒可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

不同病毒载体形式对比：

载体	转基因能力	滴度	可否扩增	效率/稳定性	主要应用	宿主反应性	生物安全等级要求
逆转录病毒	最大7kb	106-108IU/mL	难	低/稳定	体外、半体外的分裂细胞	低，具免疫原性有毒	BSL-II
慢病毒	最大7.5kb	106-1010IU/mL	难	中/高稳定	分裂/非分裂中细胞、体外及体内	低，具免疫原性有毒	BSL-II
腺病毒	最大4.5kb	1012-1013 GC/mL	可扩增	高/瞬时	体内广泛	低，具免疫原性有毒	BSL-I

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产品名称	产品应用
GIPZ Human/Mouse Lentiviral shRNA Clone	模拟microRNA设计的shRNA，高效低毒，保证沉默效率
Trans-Lentiviral shRNA Packaging kit	专为高效包装慢病毒设计，适用于第二代或第三代慢病毒载体，产生的病毒能够促进高效基因沉默
CCSB-Broad Lentiviral Expression Human Clone	可直接表达的慢病毒载体ORF基因克隆
Precision LentiORF Human Clone	可直接表达，带荧光标签的慢病毒载体ORF基因克隆
Trans-Lentiviral ORF Packaging System	专为高效包装慢病毒设计，适用于第二代或第三代慢病毒载体，产生的病毒能够促进高效基因过表达