凝胶是厚而易碎的基质,这使得操作与温浴都很困难。如果要对胶内的内容物进行杂交,必须将内容物从凝胶引导到硝酸纤维素膜或者尼龙膜上。这一过程称为转移。 转移之后,滤膜与一个探针温浴,观察探针是否能与滤膜上的分子杂交。探针由放射性元素或者其他指示剂标记,所以可以被检测。滤膜与探针的杂交称为印迹。 第一次使用印迹技术是由Southern 描述的, 因此, 这种印迹被称为Southern 印迹。 不同种类的模板与探针的使用有不同的名称。 Southern 印迹:滤膜上的DNA 由DNA 探测。 Northern 印迹:滤膜上的RNA 由DNA 或者RNA 探测。 Western 印迹:滤膜上的蛋白质由抗体探测。 Southwestern 印迹:滤膜上的DNA 由蛋白质探测。 Middle eastern 印迹: Poly (U) 来源的滤膜由mRNA 探测。 生物材料由凝胶转移到滤纸或膜上有三种方法: 毛细管转移:用千DNA 和RNA 。 真空转移:用于DNA 和RNA 。 电泳转移:用于DNA 、RNA
和蛋白质。主要有两种装置来做印迹,都是利用电流来驱动分子向阳极方向转移到膜上。分别是干式转膜仪或半干式转膜仪(电流是由浸在阳极与阴极转移缓冲液中的滤纸来携带的)和湿式转膜仪(其中凝胶与膜都浸在转移缓冲液中)
。电泳转移需要能输出高电流的电源装置。 *滤膜
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