Science推荐的三级淋巴结构，你get到了吗？

三级淋巴结构(TLSs)是在非淋巴组织中发现的淋巴结构（有组织的免疫细胞聚集物）。TLSs不存在于生理条件下，但出现在慢性炎症的背景下，如自身免疫性疾病、慢性炎症疾病和肿瘤。TLSs促进免疫细胞流入肿瘤部位，除了少数例外，肿瘤中TLSs的存在与免疫治疗后的更好的预后和临床结果相关，因此作为一种提高患者抗癌免疫和良好治疗反应的手段引起了人们的兴趣。

既然三级淋巴结构是如此attractive，今天我们一起来读这篇NC新鲜出炉的基于单细胞测序探究子宫内膜癌中的三级淋巴结构的研究吧~

研究背景

目前对于三级淋巴结构(TLSs)的识别主要有两种方式，一种是基于12个细胞因子的signature，一种是基于HE染色的结果，这两种方式均存在一定弊端，前者：临床上较难获取，后者：病理学家之间的重复性较差。所以需要开发简单的生物标志物。

文章所用数据

来自6个子宫内膜癌患者的1501个 B 细胞的自测单细胞转录组数据。

TCGA中子宫内膜癌患者的RNAseq数据及HE染色。

TransPORTEC biobank中子宫内膜癌患者的HE染色及L1CAM染色。

PORTEC-3 biobank 中子宫内膜癌患者的疾病亚型信息, 三级淋巴结构信息, CD8 及CD20 细胞密度信息，生存信息。

研究结果

（1）肿瘤浸润B细胞的单细胞测序图谱

通过对肿瘤浸润B细胞的单细胞测序数据进行聚类及细胞群鉴定，作者将所测到的B细胞细分为3种类型：naïve B cells，Germinal Centre B cells，plasma cells。为了确认每个cluster的细胞身份，作者还将其测序的细胞数据集映射到扁桃体B细胞的参考数据集上，鉴定结果基本一致。

（2）L1CAM基因在成熟的三级淋巴结构中表达

Memory B cells（MBC）和Germinal Centre B cells的存在，说明可能是正在进行三级淋巴结构(TLSs)的形成。为了验证上述推测，作者对TCGA中的HE染色切片进行观察，结果发现，三级淋巴结构(TLSs)在MMRd和POLEmut疾病亚型中较为常见。作者基于三级淋巴结构(TLSs)有无，对TCGA样本进行分组，并进行组间差异分析，结果发现有三级淋巴结构(TLSs)的样本组中与CD8 T细胞及效应细胞相关的基因高表达。从上述差异基因列表中，作者还发现了一个在三级淋巴结构(TLSs)的样本组中高表达的基因L1CAM，该基因的组织染色位于成熟的三级淋巴结构的发生中心，且与follicular dendritic cell (FDC) 的marker基因CD21共定位。为了进一步探究L1CAM是否可以作为成熟三级淋巴结构(TLSs)的标记物，作者对TransPORTEC biobank中子宫内膜癌患者的HE染色及L1CAM染色结果中L1CAM和三级淋巴结构(TLSs)出现的一致性进行了分析，结果发现两者之间存在较好的一致性。

编者按：MMRd这种疾病亚型属于子宫内膜癌各种亚型中预后情况居中的，不算最好，但是也不差，而POLEmut亚型属于预后较好的。有文章报道L1CAM基因可以作为follicular dendritic cell (FDC) 的marker基因，所以可以和该细胞类型的marker基因共定位。

（3）与成熟的三级淋巴结构相关的临床信息

为了评估成熟的三级淋巴结构的临床病理相关性，作者对PORTEC-3 biobank中的组织切片进行了分析。最终在378个子宫内膜癌组织中的71个切片中观察到三级淋巴结构（主要存在于肿瘤浸润边界和子宫肌层），与TCGA中的观察结果类似，MMRd疾病亚型和POLEmut疾病亚型样本中三级淋巴结构较为常见，且CD8 及 CD20 细胞密度在MMRd疾病亚型和POLEmut疾病亚型样本中也较高，其中CD8 细胞密度与三级淋巴结构存在之间的相关性较高。

编者按：MMRd疾病亚型和POLEmut疾病亚型样本中三级淋巴结构较为常见，这支持了三级淋巴结构可能参与免疫原性肿瘤新抗原反应形成的假设，因为有研究表明新抗原更可能出现在高突变负荷的肿瘤中。

接下来作者进一步评估了三级淋巴结构与疾病预后的关系，结果发现三级淋巴结构的存在是子宫内膜癌复发时间和肿瘤相关死亡时间的显著有利预后因素。多变量回归分析进一步证明三级淋巴结构是一个显著的、独立的有利的复发预测因子。

编者按：成熟三级淋巴结构的存在是决定POLEmut和部分MMRd 疾病亚型患者预后良好的重要因素。

文章亮点提炼

作者在高危子宫内膜癌患者中，使用L1CAM免疫组化评估了成熟三级淋巴结构的存在，提高了在临床病理危险因素和分子分类之外的复发和死亡预测的准确性。这里需要回顾本研究的研究背景，即目前常用的三级淋巴结构检测方法均存在弊端，而本研究提出的，对于三级淋巴结构检测采用单一免疫组化染色（L1CAM）具有较高的观察者间一致性，在临床试验和常规诊断中易于实现。

参考文献：

Schumacher TN, Thommen DS. Tertiary lymphoid structures in cancer. Science. 2022 Jan 7;375(6576):eabf9419. doi: 10.1126/science.abf9419. Epub 2022 Jan 7. PMID: 34990248.

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