 《中国结核病防治工作技术指南》（2021年版）标准化视频 结核病实验室分子生物学检测 主讲人：赵冰   四个方面内容 《结核病实验室分子生物学检测》主要包括四个方面的内容。包括：培训目标、职责分工、工作内容、知识要点。  培训目标  本次课程需要了解的内容如下：   ↗结核病防治关键措施有一个“四早原则”，其中最首要的是“早发现”，实现“早发现”的关键在于要有快速准确的结核病病原学检测技术。 传统的细菌学检测如抗酸杆菌涂片检测，检测时间较短（约1小时），但其理论的检测下限较低。 而分枝杆菌培养作为结核病病原学检测金标准，敏感性比较高，但检测时间较长。 分子生物学检测较传统的涂片镜检有更高的灵敏度，较传统的培养和表型药敏实验速度更快，且检测结果具有结核分枝杆菌特异性。 在最新的《肺结核诊断》标准中，分子生物学作为病原学的检测方法之一。 职责分工    现阶段，县（区）级开展结核病分子生物学的核酸检测，即结核病诊断（是或不是），而地市级实验室开展耐药检测。不具备分子生物学耐药检测技术的县（区）级，应将病原学阳性肺结核患者的痰标本或菌株送到地市级进行耐药检测。而这就涉及到标本或菌株运输的转运工作。转运工作需要注意的事项：妥善保存标本或菌株、即时转运，避免发生污染等。建议每周至少运送两次，若因距离遥远无法即时运送，应将采集后的痰标本放置于-20℃或-70℃的冰箱保存直至转运到相关检测实验室。需要注意的是，储存时间越长，越会影响后续的检测结果。 工作内容  结核病分子生物学检测按检测的目的分为：核酸检测、耐药基因筛查、菌种鉴定以及用于监测的基因分型技术。↘ ↗现阶段，常见的技术，对于结核分枝杆菌核酸检测无法区分死菌或活菌，接受过治疗或者治愈的患者排出的菌是死菌，甚至会排出DNA的片段，检测结果仍有可能为阳性（假阳性），因此不用于临床疗效的监测。 在日常的试验中，会遇到核酸检测结果与传统的涂片、培养结果不一致的情况。这里着重强调的是要保证试验质量，在试验质量无任何问题的前提下再来进行分析。 首先，如分子生物学检测结果为阴性，但涂片或培养的结果是阳性，有可能是NTM感染（非结核分枝杆菌），也就是标本中存在的是非结核分枝杆菌。在前文中提到，分子生物学检测有结核特异性，如果是非结核分枝杆菌，分子生物学检测是检测不到的。但在涂片、培养是可以检测到的。 其次，是由于标本中存在扩增抑制物，特别是痰标本中，成分较复杂，都可能会抑制扩增。这种会造成假阴性的结果。遇到此种情况，可以对样本进行稀释，可以降低抑制物的影响，但标本内仍含有一定量的DNA模板，可再次进行扩增检测。 另外一种情况是，核酸检测结果为阳性，但培养结果为阴性。这种情况可考虑患者在采集标本前是否用过药。服用药后进行痰样采集并检测，有可能排出的是死菌，所以培养检测结果可能为阴性，但分子生物学检测则可能为阳性的情况。 知识要点 END 结核学苑公众号为结核病科普知识类公众号，亦在宣传结核病预防、诊断及治疗等相关知识，助力早日实现终结结核病的目标。图文排版创意均归属结核学苑公众号，转载请注明出处。 图文编辑 | 元寳 结核学苑 科技赋能 | 知识连接你我 |
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