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食品微生物检测 稀释涂布法与平板划线法是最常用的两种微生物分离纯化方法。  一、平板划线分离法 由接种环以菌作沾取少待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落。
●用途：一般多用于从菌株的纯化 ●优点：简便快速，可以观察菌落特征 ●缺点：不能用于计数
【常见问题】 (1)培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：一般是放到50 ℃左右的恒温水浴锅里，如果没有水浴锅，用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 （2）为什么在用“分划线分离法”接种时,每次要灼烧接种环答：防止杂菌,提高培养纯度。 （3）请问生物的平板划线分离法划线时都有那些技巧啊~~~答：平板划线分离法要求后面的划线要在前一次的末尾划线,在作时要细心,划线的手尽量维持前面的姿势,左手转动培养皿。 （4）用平板划线分离法分离土壤渗出液中的细菌后,分离出来的纯种菌？答：只能说放线菌是比较多的,因为土壤这个环境适合它的生长!你说能否分离其他菌?也可以吧!在进行划线之后平板会出现多菌,像放线菌,细菌,真菌等;接下来就是鉴定了,再之后就是纯化了,这样应该可以分离所需菌种！ （5）请问平板划线分离法的原理是什么?答：接种针每次划线都会造成菌体分布更为稀疏,最终达到单菌落。 （6）用划线法分离菌种,怎样保证得到相互分离的菌落答：这个需要经常作练,不是看看经验就能掌握的。要得到单个菌落,首先需要分划线,在划线时要估计一下样本中菌的数量,以决定2之间重叠的线数;第一一般很少能出来单个菌落,因此所占平板面积不要太大,要留给后几能出单个菌落的;我总结的划线的作要点是:密、直、匀。 (7)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 (8)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (9)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：不能。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 (10)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 (11)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 (12)在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 二、稀释涂布平板法 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如 1:10、1:100 、1:1000、1:10000 …),然后分别取不同稀释液少,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散。
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。 ●用途：一般多用于筛选菌株 ●优点：可以计数，可以观察菌落特征。 计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。 ●缺点：操作相对麻烦
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