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37．[生物——选修1：生物技术实践]（15分） 3-苯氧基苯甲酸（简称为3-PBA，分子式C13H9O3，）是拟除虫菊酯类农药的降解中间产物，自然条件下难降解、易产生迁移和蓄积，具有较大的危害性。我国研究团队通过“土壤取样→富集培养→纯化培养→菌种鉴定→提取和分离降解酶”途径开展了降解3-PBA的相关研究。经鉴定，从土壤中分离到的菌种为米曲霉。回答下列问题： (1)纯化培养时，制备固体培养基的一般流程是：计算→称量→溶化→_______→_______。用平板划线法分离米曲霉时，需要使用_______挑取菌落，划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是_______。 (2)富集培养和纯化培养都使用以3-PBA作唯一_______的_______培养基，原因是：______________。 (3)下图为不同浓度3-PBA对米曲霉干重的影响。由下图可知，降解菌干重先增加后减少的原因是_______。
 【答案】 (1) 灭菌 倒平板 接种环 第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却##划线未从第一区域的末端开始 (2) 碳源 选择 只有能分解利用3-PBA的菌株才能生存繁殖 (3)3-PBA作为碳源增多，促进降解菌的生长增殖；浓度过高时，降解菌渗透失水，影响生长 【分析】 平板划线法：将培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。 【详解】 （1）纯化培养时，制备固体培养基的一般流程是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。用平板划线法分离米曲霉时，需要使用接种环进行挑取菌落，接种前为了避免杂菌污染，需要灼烧灭菌。划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，其可能原因是第一区域划线结束后，接种环灼烧灭菌后并未冷却，直接进行了第二划线区的划线操作，使得微生物因高温而死亡，无法长出菌落；也可能是第二次划线未从第一区域的末端开始划线，导致未获得菌种。 （2）3-PBA的分子式是C13H9O3，故富集培养和纯化培养都使用以3-PBA作唯一碳源的选择培养基，这样的选择培养基由于只含有3-PBA，大部分的微生物无法分解3-PBA获取能量，只有能分解利用3-PBA的菌株才能在这样的培养基上生存繁殖，以增加3-PBA降解菌的数量。 （3）分析柱状图可知，随着3-PBA浓度增加，降解菌的干重先增加后减少，说明在一定范围内，作为碳源的3-PBA含量增多，促进降解菌的生长增殖，但是如果3-PBA的浓度过高时，高于降解菌细胞内的浓度，会导致降解菌渗透失水，影响生长。 |
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