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今天给大家介绍一个适合科研小白的引物设计方法，我们以小鼠的p53基因为例。 1.基因序列检索 打开https://www.ncbi.nlm./网站，选择nucleotide，输入我们要检索的基因p53，在右边的Top Organisms下边选择基因所属的物种Mus musculus，进入如下界面，第二个即为小鼠p53基因的mRNA序列。点击第二个Mus musculus mRNA for p53. complete cds，进入小鼠p53基因mRNA序列界面。该部分会介绍基因序列的相关信息，包括基因长短，CDS区的范围及基因序列等信息。点击右侧的Pick primers进入引物设计界面。
2.引物设计 如果是qPCR引物设计，通常只需要将PCR product size大小设置为80-150, organism设置为小鼠（10090）即可，点击左下角的Get Primers即进入设计的引物信息界面。如果对所设计的引物位置有特殊要求，可以在下图右上角的range里边填入上游引物和下游引物的位置范围即可。
如果所设计的引物需要跨越外显子，可以在Exon
junction span选择Primer must span an
exon-exon junction。
设置完以上参数后，点击Get
primers即进入到设计好的引物界面。如下图是设计出的引物示意图，主要包括引物的位置信息,从图中我们可以看到所设计的引物主要位于p53基因的3'端。
下图是引物序列详细信息，包括引物长度，Tm值，互补碱基个数（代表引物自身能互补配对的碱基个数，通常引物的互补碱基数越少越好）。从下边引物序列详细信息的图中我们可以看到，引物的特异性很好，不存在非特异扩增（如果引物存在非特异性扩增，我们会在每个引物后面看到非特异扩增的基因和序列信息），接下来我们只需要根据自己的需求从pubmed设计出的引物中随机挑选适合自己的引物序列进行引物合成即可。
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