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细胞离心
小课堂
小 E 打开搜索引擎,输入“细胞离心”,发现有一些古早回答,还在用 1000 转/800 转来离心细胞。当我们信心满满地用这个参数离心细胞,那么结果很有可能让人 emo😰😰。
为什么呢?🤔🤔🤔
因为转速(RPM)不等同于相对离心力,同样的转速得到的离心效果并不尽相同,根本的解决方法还是使用相同的相对离心力(RCF)。
(点击可查看转速和离心力的换算)
下面小 E 就来详细讲一讲,细胞离心有哪些需要注意的点!!!
为什么要离心细胞呢?
1.保证细胞转移的完全性
低速离心可以防止细胞液积存在管盖和管壁,保证细胞转移的完全性。
2.便于控制细胞浓度
对于细胞浓度要求高的实验,比如需要根据细胞数计算染料浓度的实验,根据细胞数计算接种细胞量的传代实验,单细胞测序相关实验等,在细胞计数、离心收集后再根据细胞数量确定重悬体积,更利于控制细胞浓度
有很多日常的实验,都需要做细胞离心,比如:
◎ 原代细胞分离
◎ 细胞传代培养
◎ 免疫细胞分离
◎ 检测前细胞样品处理
◎ ……
细胞离心要注意些什么?
细胞本身非常脆弱,又是实验汪们含辛茹苦培养出来的,离心过程中就需要小心翼翼。以下是细胞离心过程中的注意事项:
◎ 温度敏感型细胞需要温控精准,减少细胞温度应激
◎ 细胞洗涤离心时,应尽量弃去上清,避免培养液/PBS 残留,影响后续染色等操作
◎ 升降速过程可能造成细胞的机械损伤,离心时应控制升/降速率
◎ 细胞制品在收集过程应严格控制可能产生的污染
◎ 应将离心过程标准化,利于提高实验的可重复性
细胞离心的转速和时间
转子启动运行后,升降速过程可能造成细胞的机械损伤; 活细胞的离心速度一定要低,优选水平离心,收集更充分。
不同类型细胞离心,它们适合的条件也不同。
传代细胞离心收集:
离心条件:80g-300 x g,常温或者 37°C,时间 3-5 min
检测用细胞离心:
离心条件:100g-300 x g,常温或者 4°C,时间 3-10 min
特殊细胞离心收集:
PBMC 分离条件,400 x g,4°C,20 min
点击查看【PBMC 分离技巧应用文献】
(Eppendorf 离心机低振动的性能表现,在得到良好分层效果的前提下大幅节省时间)
小 E 的离心机,有很多细胞友好的优点。让离心的效果更好,同时也能保护好珍贵的细胞样本。一起来看看吧!
细胞离心优选 Eppendorf
◎ 升降速度可控,有利于细胞梯度离心,减少机械损伤,同时防止细胞重悬,保证细胞活率和回收率
◎ 多种水平转子可选,适配各种离心耗材,充分满足实验需求
◎ 温度控制精确,离心过程的温度可实现 32°/35°/37° 等所需温度,减少温度变化对细胞的伤害
◎ “At set RPM' 定速计时功能,可在达到预设转速时才开始计时,去除了升至设定转速时耗费的时间,确保离心时间为设定时间,实现离心的充分和可重复
◎ 可选择气密性配件,最大程度减少污染风险
离心专家推荐机型:
如果你离心细胞的频率比较高,那么下面两款离心机很适合。
5702 R/ 5702 RH 台式低速离心机(点击跳转查看详情🔎)
5702 系列低速离心机具备静音运行、紧凑设计等特性,适用于低到中等通量临床研究或细胞培养实验室。
对于温度十分敏感的细胞,选择 5702 RH 温控型离心机,主动加热功能可确保在整个离心过程的温度精确性。
5910 Ri – 台式冷冻离心机(点击跳转查看详情🔎)
5910 Ri 的触屏操作界面及离心参数收藏夹等功能让离心操作非常简单:先进的温度控制系统和 10 档加减速控制,减少外力对细胞活率的影响;离心程序的储存提高结果可重复性,多种离心容器的兼容,让应用具有丰富扩展性。
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来自: 小波H > 《基础实验》
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