 00 构建敲除载体好用网站介绍 其实构建敲除载体好用的网站中，我个人比较推荐华南农业大学刘耀光院士团队开发的敲除载体的使用说明，非常清楚明了。
其网址为：http://skl./home/。 01 重点目标基因靶点设计及选择 选择下面红色矩形框，进入下一步，进行靶点设计。
进入的界面如下：
以水稻的基因ID为例进行靶点设计，可以直接输入基因ID或者基因组序列，这里是容易错的地方，不要直接放入CDS序列，这都是最开始踩过的坑，注意注意。
点击Submit之后进入下一步靶序列的评分比较以及正确选择，请看下图。
红色框1表示靶序列，红色框2表示脱靶效率（越小越好），还有一个最右边显示有8nt的不要选择。
进一步看该靶点的脱靶情况
02 敲除载体PCR引物设计
还是这个网站首页，点击引物设计，进入设计引物界面如下：
根据实验室载体的不同或者方法，我们选择一种构建成功率高的方法，如上图左边所示：
请注意靶序列输入，Please enter your target sequence (20 nt) without PAM，不需要输入NGG的PAM序列，选择方法2。
这样就得到2个靶点的PCR引物，分别用的OsU6a和OsU6b，这样重点工作介绍完成了，大家快去收藏试试吧，介绍给你们的新入实验室的同学吧。 今天就先给大家介绍到这里，需要生物软件的小伙伴关注公众号生信漫谈，私信我即可免费获取软件及安装教程，想看免费视频资料的关注微信视频号生信漫谈，希望大家的科研能有所帮助！祝您科研顺利快乐！ ------生信漫谈  |
|
|
