【原】图解病理染色 | 第1期. 组织石蜡切片制备全攻略，一篇搞定！

组织病理染色是医学科研中经常用到的一门技术，而且整个实验过程中有很多细节需要科研人（狗）去留意。因此，我们将开启“组织病理染色系列”分享，带着大家一起熟悉并掌握病理染色的方方面面！组织病理染色实验整体包括两个核心部分：组织切片的获取和组织切片染色，而组织切片又主要包括石蜡切片和冰冻切片，今天我们将针对石蜡切片，详细介绍组织石蜡切片的制备步骤，并总结各步骤的目的和注意事项。

组织石蜡切片的制备

整体来说，组织石蜡切片的制备过程涉及8大步骤：取材与固定 → 修整与冲洗 → 脱水+透明+浸蜡 → 包埋 → 切片 → 展片 → 捞片 → 烤片（可选）。下面我们来看每一个具体的步骤~

Step. 1

取材与固定

步骤：取出目标组织块，将其放入固定液（常用福尔马林或4%多聚甲醛）中，固定液的量一般为组织体积的5倍以上。固定时间根据固定液的种类一般为12-24h（对于体积大的组织，可适当延长时间）。

目的：保持组织原有形态、并使组织变得坚硬便于后续切片。

Step. 2

修整与冲洗

步骤：按需求修整组织块，放入包埋盒中，用流动自来水冲洗30分钟。

目的：洗去固定液。

Step. 3

脱水+透明+浸蜡

步骤：可使用全自动脱水机或自行操作，程序设置：75%乙醇30min → 80%乙醇30min → 90%乙醇30min×2 → 95%乙醇30min×2 → 100%乙醇20min×2 → 二甲苯20min×2 → 组织石蜡 90min×3 。

目的：

①脱水——去除组织中的水分，使组织变为亲脂性，便于后续浸蜡；

②透明——去除脱水剂，为浸蜡做准备；

③浸蜡——去除透明剂，为包埋做准备。

Step. 4

包埋

步骤：准备包埋蜡，一般选用硬蜡（56-58℃或60-62℃为宜），倒入金属框中，将组织包埋盒埋于热蜡中，放于冰台上冷却4-6小时。待蜡块完全凝固后取出。

目的：使组织块保持固定形状和硬度，便于切片。

Step. 5

切片

准备工作：准备好切片所需的切片机、冰台、刀片、毛笔、镊子、载玻片、展片机或恒温水浴箱（45-50℃）、染色架。提前将蜡块置于冰台10-30分钟以增加硬度，便于切片。切去组织周围多余石蜡，可将蜡块切成梯形。

切片：将蜡块固定于切片机上，左手执毛笔，右手转动切片机。先修出组织块并将切面修整平齐。然后设置切片厚度为5-7μm，切片。可以切成单张，也可以连续切片形成蜡带。

Step. 6

展片

左手拿毛笔轻轻托起切片，右手用镊子夹起切片一角，正面向上平铺在温水中，切片在表面张力的作用下会自然展开，必要时用镊子轻轻拨开。这一步容易弄破切片，要小心操作！

Step. 7

捞片

用载玻片竖直插入水中，靠近切片，轻轻带出，使切片贴附在玻片上，标记信息后放置在染色架上。

Step. 8

烤片（可选）

将玻片放在60℃恒温烘箱中半个小时，烤干备用。

Summary

 Preparation of FFPE Sections 

这是总流程图！薄薄切片在展片的时候容易弄破，多练习一定会切出满意的片子的

知道石蜡切片怎么制备之后，就可以进行染色了，后续我们会继续介绍常见的病理染色的实验步骤、原理和图解分析哦！