诺氟沙星含量测定
一、实验方法 Cometro高效液相色谱系统; 紫外检测器波长:278nm; Kromasil C18 250*4.6mm 5u 色谱柱; 柱温:25℃; 流动相:0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH=3.0):乙腈=87:13; 流速:1.00ml/min; 诺氟沙星对照品-0.15mg/ml,样品; 进样量:对照品分别进样5ul,7.5ul,10ul,12.5ul,15ul各3次,样品进样10ul,使样品与标准品1:1混合再进样10ul,考察线性相关性,保留时间重现性,回收率。 二、谱图结果 附进样量,保留时间,峰面积关系表: 进样量 | 保留时间/min | 峰面积/103 | 标准品5ul | 10.533 | 728.12 | 标准品7.5ul | 10.541 | 979.1 | 标准品10ul | 10.528 | 1230.741 | 标准品12.5ul | 10.524 | 1460.44 | 标准品15ul | 10.401 | 1732.42 | 样品10ul | 10.517 | 1029.987 | 样品标准品1比1混合10ul | 10.213 | 1120.78 |
三、结果运算 1、保留时间重现性考察: 保留时间 | 10.533 | 10.541 | 10.528 | 10.524 | 10.401 | RSD | 0.5588% | | | | | | | |
2、线性相关性考察及样品含量计算: 以标准品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,得线性方程:
由此可算出样品中诺氟沙星含量0.1205mg/ml。 3、回收率考察: 根据上面线性方程可算出混合后样品含诺氟沙星0.1342mg/ml,而实际真值是0.1352mg/ml,因此得回收率为99.20%。 四、综述 1、此三项考察综合考察了Cometro 6000 PVW UV/VIS检测器的吸收稳定性,Cometro 6000 LDI泵的流量精确性,进样伐、进样针的精确性,Kromasil色谱柱的优质性。 2、本实验流动相中三乙胺看似作用是调节pH,其实际最大作用是调整峰型,因为诺氟沙星有含氮极性基团,在酸性环境中容易与色谱柱中的硅羟基产生静电作用而拖尾,如下图: 而三乙胺可以代替物质与硅羟基作用,保证了物质的峰型。因此调节pH时候得注意三乙胺的加入量,不能过少,可以直接加入适量三乙胺,再用磷酸调节pH。
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