如何进行抗体检测？

楼主  发表于: 2007-10-30 15:47 | 编辑只看楼主 | 小 中 大    新城疫抗体检测 （彬哥）

一．试验材料：
注射器、抗凝剂、离心机、吸管、微量滴管、平皿、血液、抗原、有机玻璃血凝板25孔、生理盐水、废弃瓶。
二．试验步骤：
㈠红细胞悬浮液的制备：
①采血，用有抗凝剂的注射器采血5-10毫升。
②离心，将血液吸入离心管中，经3000转离心5-10分钟，吸取上清夜和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液洗涤，再加3000转离心5-10分钟，反复三次，将最后一次离心后的细胞泥按5%稀释。
㈡抗原的效价
①用微量滴管吸取2.5毫升生理盐水滴入玻璃血凝板。
②放入抗原 2滴，每孔反复十余次。
③放入红细胞离心过的7%的比例反复十余次。
④沉淀。
⑤恒温37度，20-25分钟。
㈢红细胞凝集效价：能使鸡红细胞完全凝集的病毒液的最高稀释倍数。
①    滴管向玻璃血凝板每孔加生理盐水一滴（0．025）
②    用病毒抗原液0．025毫升加入第一孔内，旋转稀释，反复操作十余次以上，然后移入第二排，第三排。（稀释倍数依次为1：2—1：2048，最后孔为红细胞对照），最后一次丢弃。
③    再以微量滴管加0。5%红细胞悬浮液一滴（同上面抗原反过来操作）。
④    振荡，再置37  恒温箱20-30分钟。
㈣最后的洗涤工作（微量反应板的特点）
①反应板先用自来水反复冲净污物后。
②干燥后，放2-3%浓度的盐酸中浸泡24小时。
③捞出后用自来水冲洗多次，干燥。
④放1%氢氧化钠过夜。
⑤取出，洁净水冲洗37干燥。
五．结果判定：
凡能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释度（倍数）称为血凝抑制价。
血凝抑制价在1：80以上为阳性，1；40为可疑，1：20为阴性。

药敏试验
一．试验器材；
高压灭菌锅、恒温箱（37度）、天平称、琼脂、三角杯、玻璃棒、酒精灯、平皿、药敏片、镊子、剪子、病料。
二．操作步骤：
㈠营养琼脂的制备：
首先用天平称取一定量的营养琼脂，放入三角杯中，再加一定量的水用玻璃棒搅匀，然后在酒精灯上加热，同时用玻璃棒搅拌直到沸腾，取出导入平皿中。
最后将称有营养琼脂的平皿放入高压灭菌锅中121度灭菌15分钟后取出，冷却后被用。
㈡病料的采集：选择典型的病料如心、肝等。
㈢将大约一立方平米的病料用镊子涂抹在冷却的平皿中，不易太厚（一般按说明分四个平皿）。
㈣将认为有效的药敏片间隔2、5厘米以上均匀平贴在涂抹层上，盖上平皿盖后，并在其上注明病料的来源、日期、何种药敏片等，倒置于恒温箱中培养24小时。
㈤判断结果：
药敏圈直径在25毫米以上时称为细菌对该药敏圈极敏。
药敏圈直径在20-25毫米时称为细菌对该药敏圈高敏。
药敏圈直径在15-20毫米时称为细菌对该药敏圈中敏。
药敏圈直径在10-15毫米时称为细菌对该药敏片低敏。
药敏圈直径在10毫米以下时称为细菌对该药敏片不敏。