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作者：米粒儿 转载请注明：解螺旋·临床医生科研成长平台 上周我们提到EGFR-TKIs获得性耐药机制已有大量研究。目前研究表明获得性耐药机制主要有以下四类：EGFR 突变，790位氨基酸突变，MET放大效应，HGF过表达，具体见下图，这些机制无一例外地最终都要通过PI3K/AKT或者MEK/Erk通路影响细胞增殖和细胞生存。 PI3K/AKT和MEK/Erk通路已成为研究EGFR-TKIs获得性耐药机制研究的不二选择。搭上ncRNA 热点，探讨ncRNA通过调控PI3K/ATK和MEK/Erk通路介导TKIs耐药也成为不错的选择，相关研究论文随处可见。 那么我们不禁要问，除了PI3K/AKT和MEK/Erk通路之外，我们就真的没有选择了吗？当然不，近期《Cancer Research》新鲜出炉一项研究，为我们找到了PI3K/AKT和MEK/Erk通路非依赖的TKIs获得性耐药机制。看着好激动有没有？试想一下，如果以此为基础，如果搭上ncRNA热点，我们又可以炮制出一大批论文是不是？ 下边为大家剖析一下这篇文章的思路，学习如何发现新的通路。 题目：Targeting FBW7 as a strategy to overcome resistance to targeted therapy in non-small cell lung cancer（回复170601下载文献） 主要内容 本文主要发现FBW7 E3 泛素化连接酶的缺失通过调节抗凋亡蛋白MCL-1稳定性产生TKIs获得性耐药。其中MCL-1稳定性的调节过程包括MCL-1磷酸化和核转位两个过程。首先Erk和GSKβ在共同调节MCL-1 Ser159氨基酸磷酸化，该磷酸化的MCL-1转运进入细胞核与FBW7相互作用。在EGFR-TKIs耐药性临床标本中发现，FBW7表达降低，MCL-1表达升高。再活化FBW7促进MCL-1降解导致抵抗性细胞抗性消失。 研究思路 本文的主要内容我们可浓缩为现象，机制和临床验证三个方面。 作者在文章一开始首先采用体内体外实验证实Fbw7缺失与获得性耐药相关。在表型实验基础上，作者试图选择Fbw7通过何种通路产生耐药，这里作者针对以往研究结果选择PI3K/AKT和MEK/Erk两个通路为研究目标，但是结果显示这两个通路在Fbw7介导的耐药过程中不发生变化。 从而发现FBW7缺失导致的细胞耐药表型不依赖于PI3K/AKT和MEK/Erk通路。同时作者指出E3连接酶活性对维持TKIs敏感性是必需的。 在上述现象基础上，作者进一步研究FBW7是如何介导耐药的？E3连接酶在介导耐药过程中发挥什么作用？ FBW7可调节c-myc，cyclin E，c-Jun和MCL-1的泛素化和蛋白酶体依赖的降解过程，基于以上事实，作者在耐药性细胞中分别敲除c-myc，cyclin E，c-Jun和MCL-1后检测细胞凋亡变化。发现只有MCL-1敲除后，细胞凋亡比例产生明显变化。 进一步的免疫共沉淀实验发现MCL-1和FBW7可相互作用，在TKIs作用时，该相互作用明显增强，并且促进MCL-1的泛素化和蛋白降解。MCL-1的泛素化和蛋白降解分为两步，络氨酸酶抑制导致MCL-1核转位和降解。最后，作者采用临床样本对上述机制进行验证。 【套路研习】 《Cancer Research》对于数据完整性和严谨性要求较高，因此本文实验设计值得大家借鉴，如有兴趣可下载精读。 但是如果《Cancer Research》并非您所求，那些复杂的实验设计也奢侈到您没有财力完成，那么本文的主要价值即为提供了研究TKIs耐药机制的新的通路FBW7/MCL-1，以此通路为基础设计出较为简单课题（如下图所示），完成3-5分文章并非不可能。 参考文献 : Targeting FBW7 as a strategy to overcome resistance to targeted therapy in non-small cell lung cancer Acquired resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors in EGFR-mutant non-small cell lung cancer: A new era begins |
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