四步教你快速读懂质粒图谱

质粒图谱为质粒DNA序列的物理图谱，提供了包括质粒的大小、筛选标记、克隆位点、转录及翻译元件等信息，为我们选择质粒、了解质粒特点及应用提供了重要依据。

如何来阅读质粒图谱？

各种英文字母有什么含义？

哪些信息又是我们有必要了解的呢？

今天教你四步，快速掌握质粒图谱。

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看懂质粒图谱的4个要点↓↓

1. 复制起点，它控制着质粒的复制，并决定了质粒的宿主和拷贝数。

2. 筛选标记，了解筛选标记类型，方便后续确定筛选重组质粒载体的方法。

3. 多克隆位点，既外源基因的插入位点。

4. 其他元件，如转录调控元件、翻译表达元件和蛋白标签等。

第1步  了解质粒图谱中的复制起点

图谱中的ori表示质粒的复制起点。质粒的复制起点决定了质粒的宿主及质粒的拷贝数相关，它是质粒中的一段特定序列，富含AT和重复序列。

Tips：

• 图谱上只有一个ori，表示质粒是原核克隆及表达质粒

• 图谱上有两个ori，则表示该质粒是穿梭质粒，既可以在原核也可以在真核中复制

第2步  了解质粒图谱中的筛选标记 

图谱中的AmpR、KanaR等表示质粒载体中的筛选标签，多为抗生素抗性基因，方便后续通过抗生素筛选阳性克隆。特点是单词最后会以大写R或上标r结束。

Tips：

• 只在一种宿主中复制的质粒仅具有一种抗性筛选标记，如原核克隆载体和原核表达载体

• 能够在两种类型宿主中复制和表达的载体会具有两种筛选标记，如穿梭质粒

第3步  了解质粒图谱中的多克隆位点

图谱中的MCS或者许多内切酶排排坐的部分，就是质粒的多克隆位点。多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点，是外源DNA的插入位点，一般可通过酶切/连接的方式将外源DNA插入质粒。

Tips：

• 位于转录启动和转录终止信号之间

• 所包含的限制性内切酶位点数量和组成因载体不同会有所差异

• 其中的酶切位点在质粒中为单一的酶切位点

• 使用时需注意质粒载体与外源DNA酶切位点的兼容性问题

第4步  看看质粒图谱中还有哪些有用的信息

质粒载体中除复制起始位点、筛选标记、多克隆位点外，还具有其他一些表达或调控元件，如转录调控元件、翻译调控元件和融合表达标签蛋白等。

1. 蛋白纯化标签蛋白：His-Tag，GST-tag等

2. 蛋白检测标签蛋白：Myc-Tag，Flag-Tag，HA-Taq等

3. 荧光蛋白表达标签：GFP，mCherry等

到了这里，质粒图谱的修炼已基本完成了~~