【原】如何选择质粒载体？

选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。载体选择主要考虑下述3点：

1.构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达，选择合适的克隆载体/表达载体。

2.考虑载体的类型：

(1)克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。

(2)表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。

(3)原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意稀有密码子，糖基化修饰和阅读框错位等问题。

3.载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。

由此可以整理选择质粒做为载体的4点要求：

1. 尽量选分子量小的质粒，即小载体（1-1.5kb），这样质粒较稳定，不易损坏，在细菌里面拷贝数也多；

2. 一般使用松弛型控制质粒(relaxed control)，其可自主复制，因此每个宿主细胞10~200个质粒拷贝，此对分子克隆有利。而严谨型质粒(stringent control)，与宿主染色体同步复制，因此每个宿主细胞中只有一个或几个质粒拷贝。

3. 必需具备多种限制性内切酶切点，但每种切口最好只有1个；

4. 必需有易检测的标记，例如抗药性标记，蓝白斑试验等。

无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。