怎样构建荧光素酶报告基因载体？

实验流程：1）查找相关基因启动子区域 2）预测启动子可能的结合位点（如果需要进行截断载体构建）3）设计启动子引物（特别重要，一对好的引物能让你快速的扩增出你需要的DNA片段，如果引物不好，无法扩增出目的片段，后面操作无从谈起）4）选择合适的载体（我常用的是PGL3-basic、Pmir-GLO等）5)选择合适的限制性酶切位点并加入引物5端，然后合成引物（查看载体图谱，查看多克隆位点区，MCS。并结合扩增序列的酶切位点找到最适合的酶切位点）6）PCR扩增目的DNA片段 7）载体和DNA片段双酶切，并按比例连接，转化，鉴定，质粒提取，最后酶切鉴定8）测序 9）测序正确后，质粒转染细胞，然后进行荧光检测。

PS:载体构建一般片段长度越长越难弄，你的2100bp还行，不算难。但对你一个初学者来说也算是挑战了，所以建议交由专门的生物公司做，当然如果你时间允许也可以自己动手。

一般的DNA聚合酶是只能扩增几百bp，因为目的片段较长而且可能出现大量的碱基错配或者碱基丢失等情况，所以推荐使用高保真酶进行PCR扩增，既能扩增大片段，也能保证扩增产物的完整性。

一般PCR扩增的试剂、酶切试剂、连接等一系列试剂都需要单独购买。后面荧光检测的试剂也需要单独购买。

就那么多吧，也不是很详细，毕竟质粒重组程序很多，很多细节也很重要，没法一一写来。