什么是多重PCR 多重PCR是在同一个PCR反应体系中,使用多对引物,对多个基因同时进行扩增的方法。多重PCR具有节约试剂及器材的经济性,以及同时检出多个基因所带来的迅速性等优点,特别适用于珍贵样品的检测。 多重PCR技术优点 ① 高效性(可在同一PCR反应体系中,对多个基因同时进行扩增) ② 系统性(很适宜于成组病原体的检测,如肝炎病毒,肠道致病性细菌等) ③ 经济简便性(大大的节省时间、试剂和经费开支) 多重PCR技术难点 反应体系的平衡(表现为有无扩增偏好性) 多重PCR好物推荐 能在复杂多重PCR反应中发挥威力的专用试剂盒 本制品是高速Priming性DNA聚合酶与能很好提高引物退火特异性的反应液配套组成的多重PCR用试剂盒。同以往多重PCR Enzyme相比,可在短时间内特异性地进行无偏差的PCR扩增。另外,调整酶量和反应时间也可对大约200对引物进行多重 PCR。使用本制品不仅能进行多重PCR,而且在非特异性扩增产物及Smear大量出现时,以及难以获得目的扩增片段的Single PCR反应时也可使用,能减少非特异性扩增产物及Smear的量,可在短时间内特异性扩增目的片段。 应用例分享 下一代测序(NGS)分析的应用例(207 plex PCR) 利用Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2(ThermoFisher Scientific,207 primer pairs)以20 ng人基因组DNA为模板对207个目的基因进行多重PCR,制备文库后进行NGS测序。 此外,从中任意选取16个目的基因使用qPCR对多重PCR扩增产物进行定量,通过与扩增前人基因组DNA的定量值(PC)和C公司产品扩增产物的定量值进行比较,确认PCR扩增产生的偏好性程度。 Coverage解析结果 多重PCR后的基因扩增的确认 实验例分享 |
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