问题4:LA结果报告表示方式?
混合试验结果可以循环抗凝指数(index of circulating anticoagulant, ICA)表示,即Ronser指数。ICA=[(1:1混合试验凝固时间-NPP凝固时间)/筛选试验凝固时间]×100%。
确证试验可以以下方式表示:
LA比值(筛选试验凝固时间/确证试验凝固时间)
标准化LA比值(筛选试验比值/确证试验比值,筛选试验比值=筛选试验凝固时间/筛选试验正常均值,确证试验比值=确证试验凝固时间/确证试验正常均值)
纠正百分比(%C =[(筛选试验比值-确证试验比值)/筛选试验比值]×100%问题
5:dRVVT是什么?
Thiagarajan P和Pengo V等于1986年首次报道dRVVT(dilute Russell's viper venom time )检测方法的应用,蝰蛇毒能直接激活凝血因子FⅩ,在钙离子、凝血因子FⅤ和磷脂存在下,激活凝血酶原导致纤维蛋白凝块形成;而样本中LA会抑制具有凝血活性的磷脂,从而延长的dRVVT筛选试验凝固时间。
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问题6:实验检测流程的选择?
目前,ISTH、BCSH和CLSI发布的相关指南关于1:1混合试验的检测给出了不同意见。ISTH 2009指出在筛选试验检测结果延长时即需要进行1:1混合试验,混合试验结果提示阳性时再进行确证试验。
BCSH 2012指出了稀释效应可导致弱阳性LA检测结果出现假阴性,因此即使1:1混合试验结果阴性,但筛选试验和确证试验检测结果提示阳性时仍然判断检测结果为阳性。
CLSI 2014重新定义LA检测流程为筛选-确证-1:1混合试验,只有在筛选试验和确证试验结果难以解释时再进行1:1混合试验。
本室采用CLSI 2014指南流程。
问题7:用于LA检测的样本要求?
CLSI H21-A5对出凝血项目的标本采集、运输、离心条件和保存要求进行了明确规定,LA检测遵循上述规定。
需要强调的是,血浆中残存血小板表面磷脂可与LA相结合,使凝血时间缩短,从而导致检测结果假性降低。尤其是冻存标本冷冻及融化的过程将导致血小板激活,释放更多磷脂。因此,要求乏血小板血浆(PPP)中血小板计数需小于10×109/L,以减少血浆中残存血小板对LA检测的影响。
ISTH 2009和BCSH 2012要求对标本进行二次离心,见下图。CLSI 2014推荐实验室在室温下对样本以1 500 g,不少于15分钟条件下,单次离心以获得乏血小板血浆,若单次离心不能满足要求,则需二次离心。三个指南均不不推荐使用滤网进行过滤处理。0.22 μm乙酸纤维素滤网过滤会导致高分子量凝血因子和血管性血友病因子(VWF)等丢失,使凝血时间假性延长。因超速离心可能会产生影响检测结果的微粒,BCSH 2012和CLSI 2014也不推荐在第二次离心时选用超速离心。
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我室目前流程:
若按照上图要求进行二次离心,无法满足常规大批量样本检测。本室经验证后离心流程为,当日检测样本原管离心一次2 400 g(3 000 rpm),10 min,离心后样本2 h内完成上机检测(前期性能验证结果显示室温下闭盖保存8 h各点间检测结果间差异无统计学意义);当日不能检测样本原管离心两次后分装冻存,分装时要求原管血浆层保留1厘米以上,以减少残存血小板对LA检测的影响。