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1、细胞铺板：选择生长状况良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7消化，离心后重悬计数，选择合适的细胞浓度稀释（2～3×104/孔）。 2、铺板：将重悬好的细胞液倒入加样槽中，吹打细胞， 混匀加样，每孔加入100 µL ，2～3列加样后重新吹打均匀（细胞易沉降），边缘孔每孔加入100 µL PBS。 3、放入细胞培养箱，5 % CO2 、37 ℃条件下继续培养过夜。 4、配药：样品 S，配制10 mg/mL溶于1 mL无菌水；样品A，配制200mg/mL溶于1 mL DMSO，分别用高糖DMEM（含10%FBS）稀释成不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8 和 1 mg/mL）。 5、将96孔板过夜培养后将完全培养液倒出，按设置的浓度梯度提取物加药，每个浓度设置3个重复样，培养 24 h。 6、将已加药培养过夜（加药时细胞接近平铺满孔底）的 96 孔板中培养基倒出，每个孔中加入50 µL亚甲基蓝染液。 7、放入细胞培养箱孵育 1 小时后取出，洗去亚甲基蓝染色液。 8、测 OD 值：每孔加100 µL洗脱液，培养液震荡15 min，放入酶标仪，继续震荡3 min后，595 nm 波长读数。 9、分析数据，需要先得出对照组的平均值，各个实验数据/对照平均值×100%得出细胞存活率，算出各个数值之间的偏差，分析药物对细胞的毒性。 实验结果：
结论：样品S在所用的浓度下，对细胞活性有显著抑制作用。
结论：样品A在所用的浓度下，对细胞活性有显著抑制作用。 |
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