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Day4
(1) New Drugs on the Horizon: Part 3 1.1 The discovery of PF-07104091: A CDK2 selective inhibitor for the treatment of cyclinE amplified cancers 现在认为，在早G1期，cyclinD-CDK4/6复合体后轻度磷酸化Rb, 可使部分Rb沉默基因适度转录激活, 但其他E2F-Rb调节的基因仍被抑制。到了晚G1期, cyclinD-CDK4/6和cyclinE-CDK2进一步磷酸化Rb成高磷酸化状态, 完全释放E2F转录因子，激活一系列DNA合成复制相关基因, 同时也激活cyclinE在内的细胞周期蛋白的转录，形成正反馈机制，不可逆转的进入S期 多个肿瘤类型中观察到编码CyclinE的基因CCNE扩增，在PALOMA-3的标志物分析中发现，CCNE1扩增患者经CDK4/6抑制剂治疗预后更差，内源性的抵抗机制 CDK2抑制剂PF-07104091在CCNE1 high的OC模型显示，pRb的抑制和呈现出血药暴露的依赖性，同样也有着剂量依赖的抑瘤效应 CCNE1 high的OC PDX模型中，PF-07104091单药就有很强的抑制肿瘤生长 在Rb失调的、CDK4/6i无效的SCLC细胞中观察到CDK2抑制引起的 在ER+ HER2-的BC细胞株中也观察到CDK2的抑制与Palbociclib的协同 基于model预测有效血药浓度Ceff 250nM 这个已经进入临床，后面大家可以关注下CDK2/4/6抑制剂 1.2 The discovery and characterization of ION-537: A next generation antisense oligonucleotide inhibitor of YAP1 in preclinical cancer models Hippo信号通路由一组保守的激酶构成，是一条抑制细胞生长的信号通路，控制着不同组织的生长、分化以及再生功能，这条通路的核心是YAP1及其同源蛋白TAZ。一旦这条通路的上游或者下游分子发生突变，这些分子就会激活原先不表达或者低表达的分子如YAP等，使其超激活，进而加速组织细胞的增殖，产生肿瘤，像在HCC和HSNCC患者中，YAP的活化往往对应着更差的预后 Ionis的第2.5代反义寡核苷酸药物，采用的cET形成双环核苷结构，相比MOE gapmer ASO效能提高10倍，可以作用于更广泛的组织靶标
YAP1活化的小鼠HCC模型从预试验中看到YAP1 ASOs（715491）展示了强效的抑瘤效应，蛋白水平上也观察到YAP1被完全抑制致，TAZ表达被部分抑制
后续也重复出了715491的这种抑瘤效应，也观察到了715491对YAP1 mRNA和蛋白水平的下调
二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠HCC模型中，YAP1和SOH基因标签激活，但是只有YAP1 ASO可以抑瘤而TAZ ASO没有抑瘤效应
免疫活性小鼠模型模型中，YAP1 ASO的抑制可以引起T和巨噬细胞在HCC肿瘤中较强的浸润，491应该比784强一些
裸鼠接受491处理后肿瘤增长停滞但是没有观察到消退
随后筛选出下一代的YAP1 ASO ：ION-537
还开发出细胞核YAP1的IHC染色用于临床开发，确认了细胞核YAP1水平与YAP1 ASO的抗增殖活性相关
HSCNN中高YAP1表达往往与差的预后相关，还有大约9%的HSCNN患者中发现YAP1扩增。虽然肿瘤抑制基因FAT1可以调控YAP1的核定位和活性，但是HSCNN中30%会发生FAT1突变。进一步研究发现，YAP1对于HSCNN细胞的生存和增殖是必须，所以治疗HSCNN时候可以选择一部分对YAP1药物敏感的亚群。免疫治疗也获批用于HSCNN，但是研究发现YAP1在Treg介导的免疫抑制中的关键作用，所以也要注意YAP1的这个特点。
HSCNN细胞中FAT1 功能缺失(LOF)也有YAP1的扩增，但是对ION527非常敏感
不管是mRNA水平还是肿瘤生长，抑制作用都很显著
临床计划
小结
(2) Adoptive Cell Therapies: Targeting Solid Tumors 2.1 First-in-human CAR T targets MUC1 transmembrane cleavage product MUC1属于粘蛋白家族，原本主要在上皮细胞中表达，通常会在肿瘤转化过程中过表达。之前针对MUC1的的尝试都以失败告终，因为是以全长的MUC1中在肿瘤细胞上被切割然后脱落并从癌细胞表面释放的那一部分为靶点
而Minerva开发的huMNC2-CAR44中的抗体部分huMNC2只针对仍然存在于癌细胞的部分MUC1（MUC1 *）——MUC1 *在75%的实体瘤中异常高表达
如下图，这也意味着huMNC2基本不结合正常组织
但是对肿瘤中表达的MUC1*有活性：后者在78%的胰腺癌、93%的乳腺癌和71%的肺癌有表达
在小鼠模型中hMNC2-CAR44有着显著的抑瘤效应，延长存活期
目前启动针对乳腺癌的临床，覆盖了包括 HER2+、HR+ HER2-及TNBC在内的乳腺癌，目前为止评估了3例患者，没有观察到SAE，2例SD+1例PR
2.2 Potent immunotherapy of human placental CD34+-derived natural killer cells with high affinity and cleavage resistant CD16 (CYNK-101) plus Trastuzumab for HER2+ gastric cancer CYNK-101：胎盘来源CD34+NK细胞， 改造了CD16后一方面增强了结合IgG1的亲和力，同时避免了被切割，从而保证持久的ADCC
另外，在胃癌患者中观察到NK细胞数量下降和功能的缺陷，而像赫赛汀之类的IgG1单抗可以通过ADCC来增强NK细胞对胃癌细胞的细胞毒作用，赫赛汀治疗后临床缓解与ADCC及NK细胞数量的升高相关，所以CYNK-101与赫赛汀联合也有一定的合理性
51-90%的CYNK-101上CD16VP过表达（相比下CYNK-NT上内源CD16只有5.6-36.7%），经改造后CYNK-101的扩增也未受到影响，CYNK-101的纯度也高达95%以上
因为引入了防止切割的突变，所以可以耐受PMAi诱导的CD16脱落，相比之下野生型CD16脱落率72%
体外活性：CYNK-101联合赫赛汀后ADCC增强，IFN-γ、TNFa和GM-CSF等细胞因子分泌升高，同时可以区分正常细胞以特异性杀伤HER2+肿瘤细胞
Ex vivo评估：相比输注前多个表面受体表达升高，提示CYNK-101在体内经历成熟，功能上不仅没有CD16脱落，而且联合赫赛汀处理HER2+肿瘤时与体外结果一致，可以可以增强ADCC及细胞因子分泌
然后In vivo数据也是证明了两者协同效应，增强ADCC
2.3 Development of dual-targeted fine-tuned immune restoring (DFIR) CAR T cell therapy for clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) 三个特点：双靶向避免抗原逃逸、亲和力优化只结合密度高的抗原、分泌ICI恢复抗肿瘤免疫
两个抗原的表达并不限定在特定的分期，另外双阳性的比例应该有40%+？
CAXI/CD70 CAR-T可以有效的杀死CAXI+或CD70+的RCC细胞，不管是单阳性还是双阳性
下面看第二个特点，由于CAXI在胆管表达，所以第一代CAXI CAR-T会引起肝毒性，所以亲和力优化后可以提高特异性，避免结合胆管上皮细胞上低表达的CAXI引起细胞毒效应
在重塑ccRCC TME的小鼠模型中，分泌PD-L1的CAXI CAR-T显示了更优的抗肿瘤活性
2.4 Chimeric antigen receptor macrophages (CAR-M) induce anti-tumor immunity and synergize with T cell checkpoint inhibitors in pre-clinical solid tumor models CAR M初次露面 过继细胞疗法治疗实体瘤时遇到许多挑战，包括迁移和渗透、TME和抗原异质性，至少在实体瘤中巨噬细胞的丰度比较高，而且过继性的转入巨噬细胞后可以观察到其归巢到肿瘤组织
M0 中转入Ad5f35载体可以诱导CAR表达，并且促进向M1表型分化，同时不影响细胞的viability
HER2 CAR-M可以清除HER2+细胞，同时上调肿瘤细胞表面MHC的表达，能增强识别这些靶点的TCR-T杀伤肿瘤的能力
免疫健全的肿瘤移植小鼠中CAR M可以控制肿瘤生长并且提升存活期
进一步发现CAR-M可以重编程并激活TME ，如增加T细胞的浸润等等
更直接驱动T细胞浸润到实体瘤区域
CAR-M免疫小鼠后可以阻止CT26-HER2+肿瘤复发，在挑战试验中还有效对抗HER2-的CT26-wt
后续试验证明CAR-M不仅促进系统性的抗肿瘤应答，还能增强远位效应，实验中小鼠腹两侧分别接种CT26-HER2+肿瘤细胞和HER2-的CT26-wt肿瘤细胞，前一部分接受CAR M治疗，发现有显著的抑瘤效应同时也观察到CT26-wt肿瘤的生长也得到了了控制 分析远部肿瘤TME也观察到包括T细胞内的免疫细胞的浸润升高
总要和PD-1 combo
(3) NextGen Stars Spotlight Session: Immunology and Targeted Therapy 3.1 From cholesterol regulation to tumor suppression: Pcsk9 as a novel target for cancer immunotherapy 这个之前Science online了 研究中发现T细胞摄入高胆固醇后会引起内质网应激，最终可能导致CD8+ T细胞的耗竭
高PCSK9水平在多个肿瘤中对应着更差的预后
在肺癌的免疫治疗中也是类似
所以就想知道PCSK9和肿瘤的关系，在多个小鼠模型中发现敲除后肿瘤生长减缓，生存期延长
用已获批的两款PCSK9抗体抑制联合PD-1单抗，可以看出很显著的协同效应
黑瘤小鼠模型中也观察到PCSK9敲除后免疫细胞在瘤内的浸润提升，特别是效应CD8+T细胞
机制？在高血脂患者中PCSK9与肝细胞表面LDL-R结合时可以防止LDL-R循环并通过内吞促进溶酶体的降解，在这里研究人员提出一个假说就是抑制PCSK9可通过减少MHC-I之类蛋白的降解增加肿瘤细胞表面抗原呈递
实验结果也的确如此
IP实验显示PCSK9可以结合MHC-I，而且其中M2对于结合十分关键
PCSK9可以通过与MHC I作用促进其在溶酶体中的定位和降解
小结下：PCSK9可以通过与MHC I相互作用后介导其内吞并被溶酶体降解，从而阻断MHC I在肿瘤细胞表面的循环利用，这时候依赖MHC I呈递抗原的细胞毒性T细胞表面 TCR就无法识别肿瘤抗原，从而使得肿瘤细胞逃避免疫系统攻击，通过敲除PCSK9基因或使用PCSK9抗体抑制PCSK9可增加肿瘤细胞表面MHC I分子的表达，促进细胞毒T细胞向肿瘤内的浸润，可能使肿瘤对PD-1在内的免疫检查点的治疗更敏感
(4) Leveraging the Immune System in the War on Cancer 4.1 Targeting regulatory T cells in cancer: From mechanisms to new therapies CD25是高亲和力的IL25受体α亚基，三元复合物高表达于Treg，在Teff和NK上主要是IL-2Rβγ
一切充满了合理性，那么为什么之前一直被摒弃了呢？在小鼠中，植入肿瘤后再用CD25就无法激活免疫治疗的活性，只有在植入前才可以，这个顺序在实操上好像就不合理了。。。
流式发现CD25抗体处理后仍然未能有效清除Treg
后续进行改造，提升了结合FcγR的亲和力，以增强ADCC、ADCP
这时改造后CD25单抗可以有效的清除浸润到肿瘤的Treg
抗肿瘤活性如何呢？单药有一定的抑瘤效应，联合PD-1有明显协同
这就够了吗？后来发现其实Teff其实也是有CD25表达的，只是很低，所以不管是这个 改造后的还是已经获批的2个CD25单抗其实都会阻断Teff上的IL2信号 进一步改造后，非IL2阻断的CD25单抗（之前还听过一家非阻断的激动剂，现在想来也是有意思）
这时候单药就体现出了很强的抑瘤效应
这里确认了Teff上的CD25信号是不能被阻断的
对冷肿瘤如何？
然后对于冷肿瘤或免疫原性差的肿瘤呢？这里疫苗+αCD25 NIB可以清除Treg，激活Teff和NK
然后和罗老师合作开发了FIC的 CD25 NIB单抗RG6292
RG6292不会干扰T细胞的IL-2信号
偏好于清除外周和肿瘤组织中的Treg，Fc功能对于清除肿瘤组织中Treg是必要的 除了清除Treg还能激活Teff
去年6月份启动单药的临床
单药及联合Atezolizumab
可以看到TME的改变，诱导了炎症表型：CD8 T大大升高，FOXP3 调节性细胞也有些许升高，可以看到这两类很明显的迁移到了肿瘤组织内部，另外肿瘤内部表达PD-L1的细胞上PD-L1上调也迁移到了内部
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