岭南特色炮天雄和传统炮附片的成分比较

岭南特色炮天雄和传统炮附片的成分比较

覃军，龚又明，郑显辉，邓广海

广东省中医院药学部

炮天雄、炮附子均属于毛茛科乌头 Acontum carmichaeliDebx.的子根的炮制品。其中，天雄是附子的饮片商品规格之一[1]， 具有温阳、止痛、祛风的功效，主要用于治疗肾亏阳虚、元阳素虚[2]， 同时是岭南地区习用为温阳补肾的食疗药材，在岭南、港澳，以及东南亚国家广泛使用。    

与炮附片相比，炮天雄的制法虽与炮附片一样需要砂烫，但炮天雄不用切片，并且两者砂烫程度也不一样，功效上，它的补阳、补虚的保健功能较炮附子强[3～4]。

那么两种炮制品化学成分上是否有一定的区别，导致其临床疗效差别的物质基础是什么？炮天雄岭南特色炮制品，目前关于其物质成分和质量标准方面的研究仍然处于空白阶段，多数厂家只能借用炮制工艺相似的炮附片的质量标准，难以保障其安全性。本文将对炮天雄和炮附片的物质成分进行研究，同时测定其有效成分和毒性成分含量，比较两者成分差异，分析与总结实验数据，为临床用药提供理论指导，同时也为炮天雄的质量控制提供一定参考依据。

1 实验材料与仪器

1.1 药 品 与 试 剂 对 照 品

苯 甲 酰 新 乌 头 原 碱 (批 号 ：111795-201102)，苯甲酰乌头原碱(批号：111794-201102)，苯甲酰次乌头原碱(批号：111796-201002)，新乌头碱(批号：110799-201106)，次乌头碱(批号：110798-201106)，乌头碱(批号：110720-201111)均购于中国药品生物制品检定，纯度均≥98% ；

炮附片、炮天雄均由广州市药材公司中药饮片厂提供，经广东省中医院主任中药师林华鉴定为毛茛科乌头Acontum carmichaeli Debx.的子根的炮制品；乙腈、四氢呋喃等试剂为色谱纯(Tedia 公司)，其他试剂均为分析纯(广州化学试剂厂)。

1.2 仪器与设备

Agilent1260 高效液相色谱仪(美国安捷伦科公司)；BS110S型电子天平(赛多利斯有限公司)；HWS28型恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)；RV10型旋转蒸发仪(德国 IKA)、SHZ- DⅢ型循环水式真空泵(上海一恒科技有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色 谱 条 件

KromasilC18 色 谱 柱 (250mm ×4.6mm，5μm)；以乙腈 -四氢呋喃(25∶15)为流动相 A， 0.1mol/L 醋酸铵溶液(每 1000mL 加冰醋酸 0.5mL)为流动相 B。流速：1mL/min；检测波长：235nm；柱温：30℃；进样量：10μL。按表 1 进行梯度洗脱。

2.2 对照品溶液的制备

取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头、新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱等对照品适量，精密称定，加异丙醇 -二氯甲烷(1∶1)混合溶液制成每 1mL 各含 25μg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末(过三号筛)约 2g，精密称定，按照 2015年版 《中国药典》附子含量测定项下“供试品溶液的制备”的步骤进行提取[1]。

2.4 线性关系的考察

见表 2。取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头、新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱等对照品溶液适量，按照上述色谱条件，分别进样0.5μL、1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、12 μL、20 μL，记录对照品峰面积，以峰面积积分值 Y与对照品含量 X(μg)进行回归处理。

2.5 精密度考察

精密吸取 6种生物碱混合对照品溶液 10μL，注入液相色谱仪，按照上述的色谱条件重复进样 6次，测定 6种生物碱的峰面积，计算其RSD% 值。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的 RSD 分别为 0.62%， 1.18%， 0.78%，0.82%， 0.66%， 0.81%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察

取同一批炮附片供试品溶液，于 0， 2，4， 6， 12， 24h 分别进样 10μL，按照上述色谱条件下，测定6种生物碱的峰面积，并计算其RSD% 值。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的 RSD 分别为 1.23%， 0.83%， 0.94%，1.05%， 1.17%， 1.22%，表明供试品溶液在 24h 内稳定。

2.7 重复性考察

 取同一批炮附片的样品 6 份，分别按供试品制备方法进行提取，采用上述的色谱条件测定6 种生物碱的峰面积，并以峰面积积分值计算其 RSD% 值。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的RSD 分别为 1.65% ， 0.78% ，2.06% ， 1.37%， 1.22%， 1.07%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率实验

 取己知含量炮附片样品约 1.0 g，共 6份，精密称定，精密加入 6种生物碱对照品适量，按照供试品制备方法进行提取，采用上述的色谱条件测定6 种生物碱的含量，并计算其平均回收率和 RSD% 值。结果苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的均 回收率分别为101.86%99.59%，97.68%，98.22%，97.31%， 96.74%，其RSD%分别为2.03%，1.80%，1.91%，1.66%， 2.07%，2.14%。

2.9 样品含量测定

见表 3，图 1。取 12 个批次的炮天雄、炮附片样品(过三号筛)约 2g，精密称定，按照制备供试品溶液制备方法进行提取，采用上述的色谱条件，测定6 种生物碱的峰面积，并计算其含量。

表 3结果显示，炮附片总单酯型生物碱含量在 0.022 9% ～0.0815% ，总双酯型生物碱含量在 0.007 8 % ～0.0122% ，炮天雄总单酯型生物碱含量在0.084 3% ～0.1042% ，总双酯型生物碱含量在 0.004 5% ～0.0087% 。结果表明，与传统炮附片比较，岭南特色炮天雄中单酯型生物碱含量较高，毒性成分双酯型生物碱含量较低。

3 讨论

炮附片为附子常见的炮制品，中医认为其经过砂烫后能过增强补命门之火力，功效以温肾暖脾为主[5]。炮天雄作为岭南特色炮制品，同样具有补火助阳的作用，临床研究发现其补阳、补虚的保健功效甚至强于炮附片。研究发现炮天雄的水煎剂对阳虚证小鼠的耐疲劳能力有提高作用，对肾虚证大鼠免疫有促进作用，延长其低温游泳的存活时间，在一定程度上能说明炮天雄具有补肾助阳功效，与《伤寒论》和 《金匮要略》里记载的“补命门、强肾气”理论相吻合，与目前港、澳中医流派对炮天雄的应用相符[6～7]。   

从炮制工艺上分析，两者有一定的区别，炮附片为黑顺片、白附片经砂烫炮制而成，而炮天雄不用切片，且砂烫程度也不一样。从化学成分上分析，附子及其炮制品均含有生物碱类成分，包括水溶性生物碱和脂溶性生物碱，其中双酯型生物碱是其主要毒性成分，经炮制后转化为毒性较低的单酯或胺醇型生物碱。那么两种炮制品化学成分上是否有明显区别，本文采用现代技术，测定两者不同批次 6种单、双酯型生物碱的含量，从化学成分上阐述物质基础，为其临床应用提供一定的参考依据。    

通过实验数据分析发现，与炮附片比较，市场上炮天雄以单酯型生物碱含量较高，毒性成分双酯型生物碱含量偏低，说明炮天雄是一种“低毒高效”的炮制品，极具岭南炮制特色。     

炮天雄中有效成分含量较高可能有两方面原因：第一，附子一般选用个头较大，质量较好的附子为原料进行炮制，导致其中生物碱成分较高；第二，附子不需要经过切片，直接整个去皮后砂烫，减少了软化切片等环节，大大降低生物碱的流失。   

2015 年版 《中国药典》中收录了炮附片，为附片经砂烫法制成，在砂烫过程中增强了补火助阳作用，但其有效成分也容易进一步受到破坏，其炮制原理还有待进一步研究。而岭南特色炮天雄的原理就是尽可能避免有效成分的损失，同时在炮制过程中增强了补火助阳作用。   

炮天雄是岭南特色的炮制品种，在国内外享誉盛名，在岭南、港澳，以及东南亚国家广泛使用。同时作为一种食用品和药膳，甚至可以用开水浸泡作茶饮用。其原因可能是炮天雄虽然为毒性中药附子炮制品，但经过炮制后其毒性成分非常低，能够保证其安全性，这与本实验含量测定的结果一致。同时有学者研究表明，炮天雄炮制后增加了单酯型生物碱含量，增强了其治疗脾阳虚症和肾阳虚症的成分[8]。

从地理环境分析，岭南地区较“湿热”，容易引起以脾胃虚弱为主征的阳虚体质[9]，因此，炮天雄更符合岭南地区使用要求和对症治疗。同时，炮天雄具有药膳同源的功用，具有巨大的市场价值，完善质量标准，有利于进一步规范炮天雄质量和开发其市场价值。

［参考文献］

[1] 国家药典委员会．中华人民共和国药典[M]．1部．北京：中国医药科技出版社， 2015：192．

[2] 李德斌，黄志芳，刘云华，等．炮天雄质量标准研究[J].中国实验方剂学， 2013， 19(23)：146- 150．

[3] 曹晖，王春燕，王孝涛．毒性中药天雄炮制历史沿革研究[J]．中国中药杂志， 1998， 23(6)：348- 350．

[4] 张德昌．对药材天雄基源的商讨[J]．中药材， 1985， 2(1)：46．

[5] 龚千锋．中药炮制学[M]．北京：中国中医药出版社，2007：313- 315．

[6] 曹晖，王时桃，吴连英，等．香港市售天雄补肾助阳药效学研究[J]．中国中药杂志， 2001， 26(6)：369- 372．

[7] 林乾良．经方中药研究集成[M]．北京：中医古籍出版社， 1992：474．

[8] 徐暾海，赵洪峰，徐雅娟，等．四川江油生附子强心成分的研究[J]．中草药， 2004， 35(9)：964- 966．

[9] 曹晖．中药天雄炮制品的生物碱含量及其急性毒性(LD50)变化的初步研究[J]．基层中药杂志， 1993， 7(2)：27- 30.