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前段时间曾经给大家介绍过组织、细胞中提取蛋白质的基本方法、注意事项及在选择不同类型裂解液时，结果出现的偏差。在提取蛋白的时候，总发现提取的蛋白量很少，这样就得好好排查下每个环节可能出现的问题，尤其得考虑，裂解液是否合适？
接下来，跟大家聊聊挑选WB内参的那些事！ 首先，先了解下，WB实验中，内参的主要作用： （1）第一点：主要起到校正作用，在蛋白样品定量及上样过程中产生的误差，在内参参与条件下以保证实验数据的准确性。 （2）第二点：就是可作为空白对照，检测蛋白转膜是否完整及发光显色是否正常！ 其次，进入今天的重点话题，如何挑选WB内参？挑选蛋白内参是非常有讲究的，现在给大家一一列取下： （1）首先，要看你研究样本的种属性，研究动物、人、植物的内参选择有天壤之别！ （2）其次，需要考虑目的蛋白分子量大小，其中内参与目的蛋白分子量大小有一定的差距，一般为相差5KD以上，这个具体情况具体选择。 （3）接着就是蛋白表达部位差异问题，不同细胞器中蛋白检测，挑选内参也有差别。如：全细胞/细胞质中的内参有以下几种供参考：β-actin、GAPDH、α-actin、β-tubulin及vinculin等等；细胞核：LaminB1、HDAC1、PCNA等等；线粒体：VDCA1、porin等；内质网：calreticulin 溶酶体：LAMP2等等。其实还有很多，大家非常感兴趣可以专门查找相关文献阅读阅读。 （4）最后，也是最重要的内容——得考虑实验处理条件对内参的影响问题，如：研究糖酵解过程中的蛋白，特别典型的就是糖尿病类疾病，这样就不可在选择GAPDH作为内参了，因为GAPDH是糖酵解过程中重要的酶！还有还有，缺氧内实验，也千万不能选择GAPDH作为内参。除了这些，经过在实验和理论中探讨，对比了不同内参的实验结果，还发现做细胞毒性实验，不可选择TATA binding protein和Lamin B作为内参，会直接影响实验结果。 那么WB造假都有什么花样？ 如何判断获得的WB图片有造假嫌疑？ 我们前期该做些什么准备才能避免WB图片遭到质疑？ 所有的一切，敬请关注今晚（9月28日），晚上18：00，就在我们的腾讯会议直播间（扫描海报二维码获取），Paper小师妹将为大家带来第五场Paper助手系列讲座——图片“误用”重灾区：拿什么拯救你，我的WB！ |
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