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1.花蜜素-4 的表达作者首先用 Western 印迹法检测了 MDA-MB-468 和 MCF-7 细胞中 Nectin-4 的表达。MDA-MB-468细胞中Nectin-4表达过高，而MCF-7细胞中Nectin-4表达较低。流式细胞术和 CLSM 成像的结果进一步表明，在 MDA-MB-468 细胞中，Nectin-4 在细胞表面高表达且具有高度特异性。 2.99m 锝-HYNIC-mAb Nectin-4 的合成与体外靶向能力Tc-HYNIC-mAb放射性核素探针 99m 成功合成了Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 ，其放射性标记率（73.03 ± 6.95%）和放射化学纯度（95.03 ± 2.40%）均很高。为了评估这种放射性示踪剂的体外靶向能力，进行了细胞摄取试验。MDA-MB-468 细胞具有特异性体外 99m Tc-HYNIC-mAb。随着时间的推移，摄取率逐渐增加，8 小时时摄取率最高，为 4.27 ± 0.09%。
3.SPECT/CT 和生物分布收集了肿瘤小鼠的显微SPECT/CT图像，以探索 99m Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 的体内肿瘤靶向性。Tc-HYNIC-mAb。在实验组中，肿瘤放射性在注射后 3 小时即可被识别，并随着时间的推移逐渐增强。此外，在一些瘤外区域，如心脏和肝脏，早期也有相对明显的放射性，但随着时间的推移逐渐减弱。相比之下，对照组和阻断组肿瘤中的 99m Tc-HYNIC-mA抗体明显较低。Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 摄取，而正常肝脏则有持续的放射性积累。作者还对 99m Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 摄取量进行了半定量分析比较。Tc-HYNIC-mAb{{5}摄取量，结果与成像结果一致。 4.mAb Nectin-4 -ICG 的合成与表征-ICG受Nectin-4靶向SPECT/CT成像结果的鼓舞，作者进一步设计了一种基于mAb Nectin-4 的荧光探针（mAb Nectin-4 -ICG），作为TNBC异种移植PTT的PTA。-的荧光探针（mAb Nectin-4 -ICG）作为 TNBC 异种移植 PTT 的 PTA。mAb Nectin-4 -ICG在280 n波长处出现特征性吸光度峰。-和游离 ICG 相似。这些结果证明 mAb Nectin-4 -ICG 的合成是成功的。-ICG 的光学特征无明显影响。因此，作者根据不同浓度游离 ICG 的 790 nm 吸光度值进一步确定了回归方程（Y = 0.003244 * X + 0.01402），并以此计算 mAb Nectin-4 -ICG 溶液中 ICG 的浓度。-ICG 溶液中的 ICG 浓度。
5.mAbNectin -4 -ICG 的光热特性-ICG为了研究 mAb Nectin-4 -ICG 的光热转换效应，作者记录了 mAb Nectin-4 -ICG 的温升。为了研究 mAb {{0} -ICG 的光热转换效应，作者记录了 mAb {{1} -ICG 在不同浓度或功率密度的 ICG 激光照射下的温升。在不同浓度或功率密度的ICG激光照射下，作者记录了mAb Nectin-4 -ICG的温升。首先，在 mAb Nctin-4 -ICG 溶液中加入不同浓度的 ICG。首先，将不同浓度（0（水）、1、5、10、20 和 30 μg/mL）的 mAb {{2} -ICG 溶液暴露于 1 W/cm 2 功率密度的 808 nm 激光下。结果表明，溶液温度随 ICG 浓度的增加而升高。当 ICG 浓度达到 20 μg/mL 时，溶液温度在照射后 2 分钟内迅速升高，超过 55 °C（起始温度 = 室温：25 °C，△T > 30 °C），并继续缓慢上升。这一结果表明，当 ICG 浓度超过 20 μg/mL 时，细胞损伤温度阈值（42 °C）即可达到。 6.mAb Nectin-4 的体外生物学安全性和靶向性-ICG为了验证 mAb {{0} -ICG 的体外靶向性，将 MDA-MB-468 细胞与这种 PTA 一起培养，然后进行荧光成像。为了验证 mAbNectin-4 -ICG 的体外靶向性，将 MDA-MB-468 细胞与这种 PTA 一起培养，然后进行荧光成像。与mAb Nectin-4 -ICG 共同孵育的细胞有明显的荧光吸收。-ICG共孵育的细胞有明显的荧光吸收，而在被阻断的细胞和游离ICG处理的细胞中只观察到很少的荧光信号。这证明通过抗原和抗体的特异性结合，PTA 可以靶向高表达 Nectin-4 的细胞。荧光强度的半定量分析也支持上述结果。 7.mAbNectin-4-ICG 的体外 PTT将 MDA-MB-468 细胞与 mAb {{0} -ICG/free ICG 一起孵育。｝-ICG/游离 ICG 培养后，用不同 ICG 浓度、功率强度和照射时间的激光照射分析体外热消融效率。总的来说，游离 ICG、仅 mAb {{1} -ICG｝-ICG、仅激光和游离 ICG 加激光的细胞毒性几乎可以忽略不计。仅游离 ICG、仅 mAb Nectin-4 -ICG、仅激光和游离 ICG 加激光各组的细胞存活率均在 90% 以上。在 ICG 浓度为 30 μg/mL 时，仅游离 ICG 组、仅 mAb {{2} -ICG 组和游离 ICG 加激光组都有一定程度的细胞致死率（约 10%），这被认为是游离 ICG/mAb {{3} -ICG 的固有毒性。-ICG的固有毒。 8. FL 成像为了探索 mAb Nectin-4 -ICG 的体内肿瘤靶向特性以及 PDT 的最佳时间窗口，研究人员在 MDA-MB-468 TNBC 肿瘤小鼠体内注射了 mAb Nectin-4 -ICG。-ICG和PDT的最佳时间窗，给MDA-MB-468 TNBC肿瘤小鼠注射mAb Nectin-4 -ICG、游离ICG或生理盐水，在不同时间点进行体内FL扫描。-ICG、游离 ICG 或生理盐水，在不同时间点进行体内荧光扫描。mAb Nectin-4 -ICG的荧光信号主要聚集在小鼠的钙化区。-相比之下，注射游离 ICG 和生理盐水的小鼠没有捕获到明显的肿瘤荧光信号。异种移植肿瘤 ROI 的 FL 定量分析和肿瘤/肌肉（T/M）半定量分析也显示了相同的趋势。
9.体内抗肿瘤研究利用 MDA-MB-468 肿瘤小鼠进一步研究了 mAb {{0} -ICG 介导的体内 PTT 效应。｝-使用 MDA-MB-468 肿瘤小鼠进一步研究了 mAb {{0}-ICG 介导的体内 PTT 效应。mAb Nectin-4 -ICG + 激光组小鼠在接受 808 nm 激光照射后，肿瘤温度在 2 分钟内迅速升高（△T = 15 °C）。-ICG + 激光组小鼠的肿瘤温度在 2 分钟内迅速升高（△T = 15 °C），超过了损伤阈值（42 °C；裸鼠基体温度约为 30 °C），将导致不可修复的组织损伤。相比之下，在激光照射后，游离 ICG + 激光组和生理盐水 + 激光组小鼠肿瘤部位的升温分别不超过 10 ℃ 和 5 ℃（均未达到损伤阈值），这表明游离 ICG 介导的照射或单独的激光照射都无法引发有效治疗所需的高热。在未接受激光照射的小鼠中，肿瘤部位的温度几乎没有变化，甚至略有下降，这可能与持续麻醉有关。
至此，这篇文章就介绍完啦，总结一下：文章首先深入探讨了Nectin-4在三阴性乳腺癌（TNBC）中的表达；第二部分，展示了基于抗Nectin-4单克隆抗体（mAbNectin-4）的治疗诊断对99mTc-HYNIC-mAbNectin-4和mAbNectin-4-ICG在TNBC诊断和光热疗法（PTT）中的应用；第三部分，详细描述了mAbNectin-4-ICG在体内的生物分布和肿瘤定位；第四部分，探讨了mAbNectin-4-ICG介导的PTT在TNBC肿瘤破坏效率和系统毒性方面的表现。整篇文章知识丰富，为作者提供了一个新的TNBC的治疗诊断平台的研究方向，对于从事肿瘤研究的小伙伴来说，这是一个不容错过的学习机会哦！ |
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