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细胞死亡或细胞毒性通常通过评估质膜损伤的程度来评估。乳酸脱氢酶（LDH）是一种细胞内酶，在细胞损伤或裂解时释放到细胞外介质中，使其成为细胞毒性作用的有用指标。 AkrivisBio 的LDH细胞毒性测定试剂盒用于评估细胞膜完整性并测量细胞死亡或细胞毒性。该检测利用WST，一种四氮唑检测试剂，对受损细胞的LDH释放进行快速、高灵敏度的测量。颜色的强度与受损细胞的数量直接相关。 Catalog：CPT-0101 Size：Includes reagents for 500 reactions Sample Type：Cells Species：Non specific Method of Detection：Colorimetric, OD 450 nm Assay Type：Quantitative Application：For the detection of LDH released from damaged cells. Range：20000-100000 cells/100 µl in wells of a 96-well plate Storage Conditions：4°C Shipping Temperature：Gel Pack Shelf Life：One year from the date of delivery ———————————————————— 目录：CPT-0101 尺寸：包括500个反应的试剂 样本类型：单元格 物种：非特定 检测方法：比色法，OD 450 nm 化验类型：定量 应用：用于检测受损细胞释放的LDH。范围：20000-100000个细胞/100µl，在96孔板的孔中 储存条件：4°C 运输温度：凝胶包装 保质期：一年 AkrivisBio LDH基于细胞毒性的测定组成： WST检测试剂1 ml透明NM MA-0109-A 含量测定缓冲液50 ml NM MA-0109-B 细胞裂解液5 ml琥珀色NM MA-0109-C 停止溶液5 ml蓝色NM MA-0109-D LDH（阳性对照）~1 U红MA-0109-E 染色方案： 1、收集细胞（粘附或悬浮液），用新鲜培养基洗涤一次，然后将2-10 x 104个100µl的细胞加入96孔板的孔中，如下所示： a.背景对照：每孔100µl无细胞培养基，一式三份。这允许校正由于试剂或来自培养基血清的LDHbackground引起的任何颜色。必须从所有其他值中减去背景值。 b.低对照组：每孔100µl细胞，一式三份。 c.高对照组：每个孔100µl细胞，一式四份，每个孔加10µl细胞裂解液并混合。为了校正对合组的差异，可以在步骤4（如下）中使用11µl培养基。 d.测试样品：每个孔100µl细胞，一式三份，再将测试物质添加到每个孔中并混合。 注： ·胰蛋白酶或其他更温和的方法可用于分离粘附细胞。 ·每个孔使用的细胞数取决于细胞类型。为了优化测定，每个孔使用2、4和8 x 104个细胞进行快速测试，然后按照测定方案确定应使用的细胞数。用10%细胞裂解液处理30分钟后，高对照应为~2OD450 nm。在约30分钟时，低对照应<0.8 OD450 nm。 ·在1-2个孔中使用阳性对照（3-5µl LDH），以证明所有试剂对活性LDH酶都能正常工作。·如果试验物质未溶解在PBS中，则应通过添加相同量的溶剂进行溶剂控制，一式三份，不添加其他试验物质。 2、将细胞（5%CO2，90%湿度，37°C）孵育一段适当的处理时间，该时间由受试物质决定。培养结束后，轻轻摇动平板，以确保LDH在培养基中均匀分布。 3、以600 x g离心细胞10分钟，使细胞沉淀。 4、将透明介质溶液（10µl/孔）转移到光学透明的96孔板中。 5、向每个孔中加入100µl LDH反应混合物，混合并在室温下孵育30分钟**。 6、用读板器在450 nm处测量所有对照品和样品的吸光度。 注意： ·根据显色速率调整反应时间。可以在多个时间点读取印版，直到观察到所需的读数。高对照应为OD450 nm~2.0，而低对照应为OD 450 nm<0.8。 ·可通过添加10µl停止溶液来停止反应，混合并在48小时内读取，无显著变化。保护反应不受光照和蒸发的影响。 |
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