【原】线虫产卵实验protocol

一、实验名称：线虫产卵实验

二、实验目的：XX对秀丽隐杆线虫产卵的影响

三、材料方法：

1、仪器耗材：

体视显微镜；生化培养箱；恒温培养摇床；立式压力蒸汽灭菌器；

XX：xxmg/mL；野生型 N2 （Bristol）秀丽隐杆线虫（C.elegans）。

2、实验方法：

（1） 固体培养基（nematode growth media，NGM）配制 ：称 4.0 g 琼脂、0.5 g 蛋白胨、0.6 g NaCl 加入 100 mL 蒸馏水溶解摇匀，再加入 1 mol/L MgSO₄ 溶液、1 mol/L CaCl₂ 溶液各 200 μL，pH6.0 磷酸氢钾缓冲液 3.25 mL， 摇匀后补足蒸馏水至 200 mL。121 ℃ 高压蒸汽灭菌 20 min，温度降至 60 ℃ 左右，加入 200 μL 5 mg/mL 胆固醇乙醇溶液，倒板备用。取 L4 期野生型 N2 线虫于涂布 OP50 的 NGM 培养基内，观察其产卵情况，开始产卵 4 h 后，将 L4 期成虫挑去，将卵培养至 L4 期成虫，该批成虫即为同期化成虫。

（2） 加药组与对照组NGM的配制：加药组 NGM 配制方法同1，加入XX配制成xx mg/mL的 NGM 培养基，对照组 NGM 的配制方法同 1，加入与XX等量的蒸馏水，配制成对照组 NGM 培养基。

（3） 将同期化的 L4 期野生型 N2 线虫，随机挑取 1条至加药组与对照组，每组 5个培养皿，此时记为产卵第 1 d， 每隔 24 h 将线虫挑至新培养基中，每天记录虫卵数目（产卵量）连续记录5天，实验重复 3 次。整理数据并绘制曲线。

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