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根据世界卫生组织国际癌症研究机构发布的2020年最新癌症数据显示，全球新发肝癌91万例，中国新发肝癌41万例，也就是说，全球一半新增肝癌在中国。而我国每年死于肝癌的患者约有39万，具备发病率高，死亡率高、预后极差等特点。致使5年生存率仅为12%，中晚期肝癌患者的5年生存率更是低至3%。
由于肝癌早期的症状十分隐匿，不易被患者察觉，等到症状明显时90%以上的肝细胞癌患者就已处于中期或终末期，尤其是晚期弥漫性肝癌预后极差，中位生存期不足3个月。 研究发现，肝细胞中肝炎病毒的持续感染和黄曲霉素的过量积累是引发肝细胞癌的主要原因，此外过量饮酒、长期吸烟、肥胖以及遗传等因素也是引发肝癌的重要影响因素。如果不采取有力的干预措施，这种状况将持续数十年，大量的肝硬化、肝癌病例，将给患者家庭和社会带来沉重的经济负担。 目前肝细胞癌的主要治疗方法是手术(肝切除或肝移植)、放疗、经导管动脉化疗栓塞(TACE)和靶向治疗(如索拉非尼)，中晚期肝癌患者一般已经不具有手术移植的价值。即使是肝脏切除，3年内约有70%的人在残留的肝脏内发生新的癌症。因此，肝癌患者迫切需要新的治疗方法来解决当前的困境。 近年来，生物免疫治疗是近几年备受青睐的肿瘤治疗新技术。NK细胞治疗是其中的一种，NK细胞是具有直接杀伤功能的天然免疫效应细胞，在清除肿瘤细胞中起关键作用，NK细胞治疗联合传统肿瘤治疗手段能够有效提高肿瘤治疗效果。 NK细胞占肝脏淋巴细胞总数的25%～50%，在肝脏免疫中发挥重要作用，NK细胞的衰竭和细胞因子的产生受损可能是肝癌发生的预测因子，肝癌患者外周血中的NK细胞数量与患者存活率和预后密切相关。 研究表明，肝癌患者的NK细胞活性显著降低，提高NK细胞活性有助于预测肝癌患者肝切除术后的复发和预后。 自然杀伤细胞（natural killer cell，NK细胞）是除 T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，甚至参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。NK细胞来源于骨髓造血干细胞，属于先天免疫系统的核心细胞，约占血液中所有免疫细胞数量的15%；主要分布于外周血、肝脏和脾脏。 MD安德森癌症中心的免疫治疗专家Katy Rezvani说，NK细胞是集功效、安全性和相对易用性为一体理想细胞疗法。 第一，NK细胞不需要抗原呈递，起效更快速。 第二，NK细胞具有更广谱的抗肿瘤作用。 第三，没有严重的副作用。上述诸多特点都无不在彰显，对抗实体瘤，NK细胞可能比T细胞更具优势。 NK细胞治疗肝癌的临床研究 目的： 了解肝癌患者过继回输异体自然杀伤(natural killer, NK)细胞后的安全性。 研究对象： 选择2016年5月至2016年8月在北京解放军第三〇二医院生物治疗中心经手术或放化疗后的4例肝癌患者。 4例肝癌患者均为男性，年龄45~62岁，其中３例为慢性HBV感染导致的肝癌，1例为酒精性肝炎导致的肝癌，目前主要的治疗方式为手术、射频和对症支持治疗。供体为患者直系亲一代健康人，年龄19~38岁，采集外周血50mL，分2次连续2d回输。
方法： 入组18-50岁健康的肝癌患者直系亲属作为供者，肝癌患者作为受者。采集供者外周血50~80ml，分离PBMC，用无血清培养基和细胞因子培养，分别于培养的14d、15d回输给受者。回输剂量为0.5X10^9〜2.5X10^9/次。 患者均于基线和治疗后4周、12周检测肝功能、肾功能、肿瘤标志物、血常规、凝血功能。患者NK细胞回输前后分别检测体温、血压、心率。 NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力是评估NK细胞功能的重要指标和依 据。以HepG2细胞系为靶细胞，采用流式染色法检测所培养细胞的表型和功能。将NK细胞分别按0:1、3:1、10:1、10:1的效靶比和CFSE标记HepG2细胞共培养，分别在培养的4h、8h进行7-AAD染色，被NK细胞杀伤的HepG2为7-AAD+CFSE+占CFSE+细胞的百分比。
结果： 供者外周血单个核细胞扩增培养可得到2X10^9〜5X10^9个细胞，其中NK细胞占总细胞数的49%〜83%。体外杀伤实验表明，培养的NK细胞对HePG2肝癌细胞系具有显著的杀伤能力，并与效靶比呈正相关，添加IL-2可以进一步提高NK细胞对HepG2细胞的杀伤能力。 回输后，4例肝癌患者无GVHD反应，肝功能、肾功能、心血管功能正常。2例患者有一过性体温升高，其中1例最高为38.5°C，持续4h，另1例最高为37. 8°C，持续7h，未经任何治疗均自行缓解。 在随访观察的3个月里，患者接受HLA半相合NK细胞治疗后与治疗前相比，白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白、血小板、肝肾功能等均差异无统计学意义。表明NK细胞过继回输在肝癌患者中有着良好的安全性和耐受性。 结论：本试验证实了直系亲属来源的HLA半相合异源性NK细胞具有良好的安全性，并且有着广泛的临床应用前景。 相比传统的肝癌治疗手段，NK细胞疗法可以在体内激活和增殖，具有持久抗肿瘤作用，能有效增强机体的免疫反应，发生严重毒性反应的概率更低，患者耐受性更好，可延缓肿瘤的进展，可提高患者短期生活质量，改善临床症状，多项肝癌临床试验显示，免疫治疗可提高患者的总生存率和无瘤生存率。 |
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