【原】干货分享｜Trizol法抽提细胞内总RNA

试验材料：细胞（5 × 10⁵/每管×35），每人2管×15；

试验试剂和耗材：Trizol（1瓶）,氯仿（1瓶）、异丙醇（1瓶）、无水乙醇（1瓶）、DEPC水（1瓶）、RNA-free EP管（一袋）、EP管架（15个）；

试验仪器设备：低温离心机（1~2台），枪（1 ml、200μl、10 μl）× 15套，通风橱（1~2台），NanoDrop微量紫外-可见光分光光度计

1，细胞用50~100 μl PBS重悬后，加入1 ml Trizol (一般1×10⁷细胞加入1 ml左右的Trizol), 按照1:5的比例加入200 μl氯仿，用力震荡30秒后室温静置，使其裂解充分（3~5 min）；

2，离心15 min × 12000 rpm，4℃；

3，吸上清至新的离心管(小心勿吸到中间层的DNA，宁可损失一点)，加和上清等体积的异丙醇，温和的上下颠倒数次混匀，室温放置10min后离心10 min × 12000 rpm，4℃；

4，弃上清，加1 ml RNase-free 75%乙醇，离心5 min × 12000 rpm，4℃；

5，倒掉乙醇，2 min × 12000 rpm，4℃，用RNase-free的枪头吸掉上清；

6，之后在通风橱吹干（大风3~5 min），使酒精完全挥发（酒精会严重影响酶的活性）；

7，加入30~50 μl RNase-free H₂O，反复吹打、混匀、充分溶解RNA，用RNase-free H₂O稀释（80倍左右）测OD值。测定样本在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量，1OD = 40 μg RNA来计算RNA浓度, OD260/280在1.8~2.0之间确定RNA样本纯度很高。

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