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HE染色是病理染色技术中最基本的一种染色方法。一张质量合格的 HE 染色切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。许多所谓的“疑难病理案例”，大多数是由于制片质量差、HE染色模糊所造成的。下面就HE切片中几种常见问题及解决方法叙述如下：
形成原因：切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水，导致二甲苯透明、中性树胶封固后残留大量水分。 解决方法：首先移去盖玻片，用二甲苯溶解封固剂如中性树胶；再将切片置入无水乙醇内；待切片重新脱水完全后，用二甲苯透明；中性树胶封固；所有用于脱水和透明的液体，在使用一定时间以后，应及时更换。
形成原因：主要见于苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。 解决方法：首先是每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现苏木精染色液氧化过度应及时更换；其次，切片经苏木精染色后，要给切片以足够的蓝化时间，蓝化的过程可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水或0.2%碳酸氢钠等处理。
形成原因：由于烤（烘）片温度太低，切片上的组织蜡膜在脱蜡前没有充分烤（烘）融化；由于切片在二甲苯液中停留时间不足，或二甲苯使用过久，造成脱蜡不尽。 解决方法：若是由于切片烤（烘）温度低所致上述情况，可以先用二甲苯去除切片上的封固胶，然后重新用二甲苯脱去切片上石蜡，接后续染色；若是由于切片在脱蜡的二甲苯液体中停留时间不足或是脱蜡的二甲苯使用过久，浓度不足所致的上述情况，切片则需退回到二甲苯液体中，停留时间相对长些，或更换新的二甲苯液体，重新脱蜡、再入乙醇重新脱二甲苯、入0.5%盐酸水溶液褪色后，重新HE染色。
形成原因：此种问题可能有3个影响因素：切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用；分化步骤处理时间过长。值得注意的是若骨组织细胞核暗淡，则多数是由于脱钙过度造成。 解决方法：切片重新染色。如果组织在酸性固定液如 Zenker、Bouin 及非中性缓冲甲醛液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。例如：建议上述组织玻片最好使用 Weigert 铁苏木精染色液；如果组织是用 Zenker 液固定的，可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4 h，流水冲洗5 min 后染色；如果组织是用 Bouin 液固定的，可将切片脱蜡后放在5%碳酸锂1 h，流水冲洗10 min 后染色。
形成原因：此类问题可能有3个影响因素：玻片在苏木精染色液停留时间过长；切片太厚；分化步骤时间太短。 解决方法：如果切片不是因为太厚（用显微镜仔细上下调节微调，只有一二层细胞核层次），脱色、漂白、重新染色，对于染色和分化时间做些适当的调整。如果确定是由于切片太厚导致的细胞核过染，则需要重新切片。
形成原因： 伊红染液的 pH 值可能大于5；也可能是蓝化液残留过多；切片太薄；切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。 解决方法：检查伊红染液的 pH 值，如果必要的话，用乙酸将其调节在4.6～5.0之间，从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后，使用的弱碱性溶液被充分洗去，玻片上没有残留的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长，因为含水多的低浓度乙醇会将切片伊红的颜色分化掉。
形成原因：1.伊红染色液浓度太高，特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；2.切片在伊红染色时间过长；3.切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时时间太短，而使乙醇分化伊红的作用不能产生。 解决方法：适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停留时间相对均匀。同样，也要检查切片的厚度是否合适。
形成原因：苏木精染色液中的金属膜，黏附在玻片上。 解决方法：每天染色前仔细过滤苏木精染色液，或建议使用半氧化苏木精染色液，如 Gill 苏木精染色液，可以避免过多的金属膜产生。
形成原因：盖玻片上可能有封固切片的封固剂。 解决方法：移去盖玻片，重新用干净的盖玻片封片。检查切片封片方法，是人工手工封法，还是机器自动封法，如有问题及时调整。
形成原因：1.盖玻片弯曲或不平整；2.封固剂含二甲苯过多，稀释过度。 解决方法：移去盖玻片，重新找一张盖玻片，用干净的封固剂封片。如用手工封片法，每天保证盛装封固剂的容器，在封固结束的时候盖紧盖子。尽量使用小的容器盛装封固剂，一旦封固剂太粘稠，就可以废弃不再使用。
形成原因：1.可能是由于组织处理温度过高、过热，在液体石蜡中停留的时间过长；2.或者固定时间太短，接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。 解决方法：理论上来说，加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用，组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理，完成浸蜡处理后的组织，可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中，冷却凝固，以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好，脱水最好能从低浓度的乙醇开始。
形成原因：切片封片前放置在空气中时间太长，以至于二甲苯挥发切片干燥所致。 解决方法：移去组织切片上的盖玻片和封固剂，重新处理。将切片水洗数分钟，然后重新脱水、透明、封固。封片过程中要保持组织切片的轻度湿润，尽量不要让其干燥。 总之，HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法，无论是手工还是机器操作，都存在着许多影响因素，甚至会出现不理想的染色结果，从而导致诊断医师误判和误诊。所以，除提高病理医生的诊断水平外，培训病理技术人员的技术能力也是当务之急。 审核：程新宇主任技师 沈阳医学院附属中心医院病理科 编辑：常青
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