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牟宽厚 张宪旗
陆庭斌 冯 捷 西安交通大学第一医院 皮肤科 (710061) 摘 要
目的：研究中药对体外培养的人黑素细胞生长的影 响 。 方 法 ：通 过 测 定 黑 素 细胞酪 氨 酸 酶 活 性 、 黑 素含 量及 细胞 增 殖 情 况 ，
了 解 药物 浓 度 和 生长 的 关 系。 结果 ： 浮萍、 紫丹参提取 物浓度 在0一200~g／m l 时对黑 素 细胞 促 生长作 用 明显 ，且 呈 剂 量依
赖 关 系， 而 药物 浓 度 高 于 2 00 vg ／m l 时
并 未 见 生 长 促 进 作 用 增 加 。结论：中药浮萍、紫丹参 对黑素 细胞 体 外促 增殖作 用 显著 ，这将 为 此类 中 药作为 治 疗 白癜风的组方成
份 提 供 理 论依 据 。 主题 词
浮萍／药效学 紫丹参 ／药效学 在对存 在 的数
千种 中 药筛 选 研 究 中 ， 我 们发 现 浮 萍、紫丹参 对 白 癜 风有 明 显 的改 善作 用 [3]，
为 此 我们 采用 经典的中药 乙醇 萃取 其 有 效 成 份 ，研 究 了 其 对体 外 培 养 的黑素细 胞 生 长 的影响 ，报 道 如下 。 材料和方法
1 材料及试 剂 标 本 来 自正常成年男 性
包 皮换 切 术后 之 包 皮 (年 龄< 22 岁 ) ， 主要 试 剂 及 仪器 包 括 D M E M — F “培 养
基 (Sig m a) ， 四 甲 基 偶 氮 唑 盐(M T T ，
华 美 ) ， 霍 乱 毒 素 (C T ， Sigm a ) ， 肉 豆 寇 (T P A ，Sigm a ) ， 左 旋 多 巴 (L — D opa， Sig m a ) ，黑 素 标 准 品(Sigm a) ，二 甲基 亚砜 (D M SO ， 西安化学制剂厂 ) 。 2 方 法 2．1 中药 提 取物 制 备 浮 萍 、紫 丹 参 均购自西安 市 药材
公 司 并 请 陕西 省 中医研 究 院鉴 定 。 取生药粉 碎，各 取 10g 用 90 乙醇 常温 下浸 泡 1 0d ，每 天振摇数次 ，滤过除 渣，收集提取液置沸水浴中
， 待乙醇挥发后 ，将稠膏状提取物用 二甲基亚砜溶解，调 整 浓 度 至 lg／m l，一20℃保存备用 。 2．2 黑 素细 胞 培养 参 照 文献
“ 进行 ，并 多 巴染 色 鉴定所 培养 的细 胞 即 为 黑 素细 胞 。 2．3 加 药 将 传 代 (第
二代 ) M C 计 数按 种 于 7 个 培养瓶 中 ， 确
保 每瓶 细 胞 数 相 同 ， 加 入 中 药 ， 试 验 浓 度 分 别为10μg／ml、 50μg ／m l、 100μg／m l、 150μg／ml、 200μg／ml、250gg／m l 【（1,000微克(μg)=1毫克(mg)，1,000毫克(mg)=1克(g)）及空白对照 组，培 养 3d 。 2．4 测 定 酪 氨 酸 酶 活 性 参 照 文 献 [5]进 行，消化细胞 ，重 新 按 种 于 96 孔 板 (每 孔 细 胞 数 2 × 10。)
， 每 孔 加 入磷 酸 盐 缓 冲液 含 1 T ritonX - - OOgl， 超 声 振
荡 lOm in 后向 每 孔分别 加入 0． 1 L - - D opal00gl，对 照组 加 入磷 酸盐缓 冲 液 于 37℃ 下孵
育1h ，490nm 处 测 定 其 吸光 度 A 值 ，结 果 见表 1 。 2．5 细 胞 黑 素含量 测定 采 用
N aO H 溶解 法 ]， 同上法 采用 96 孔培
养板 接种 细 胞 ， 每 孔加 入 100μll mol／L 的氢 氧化 钠 ，37 ℃保 温
1h ，测 其 在 45Oh m 处 的吸光 度 值 ，绘制 黑素标 准 曲线 ，计 算 黑素 含量
，结 果 见表 2 。 2．6 四 甲基 偶 氮 唑 盐 比色 测 定 细 胞 增 殖 活力参照文
献D ]， 将 细 胞 按 种于 96 孔 板 (每 孔 细 胞 数 为 2 × 10。) 仍用 上 述 7 种 浓 度 培 养
3d 后 ， 吸 出 培 养 液 ， 于 每 孔 加 入M T T 溶 液 1 00gl 于 37 ℃反 应 4 小
时 ， 弃 去 M T T ， 每 孔 加入 1 OO D M SO 并
振 荡 10m in ， 充 分 溶 解 结 晶 物 ， 490nm处
测 定吸光 度 A 值 ，实验 结 果用 细 胞增 殖 率表 示 (实
验组A 值 ／对 照组 A 值 × 100) ，绘 制 浓度 生 长 曲线 结 果见 表 3及 图 1 。 3 统计学处理 用 S PM R 医用统计软件包进行运算。 注：与对照相比，药物浓度表在10μg／m I时，统计检验
P >0.05，余各组P均小于0．0 5。同样200μg／ml与 250μg／ml 组 相 比 P > 0.05。其中0μg／mI者即为对照组。每组浓度下设定6个检测样本（即n=6），检测结果用用x¯±s 表示 。 讨 论
白癜风的治疗一直是皮肤科的一大难题，尽管到目前为止治疗的方案很多，包括；免疫疗法、皮 肤移植、黑素细胞移植、补充微量元素、光化学疗法等[8]，但仍未有一种方 法是彻底有效的 ，从传统的中药出发探求一种有效的中医治疗途径无疑具有较大的临床意 义。在对多种自制和商品化的中药治疗白癜风的成份研究中，我们发现浮萍和紫丹参常常被
选用[q]。显然对此种疾病治疗方案来说：刺激黑素细胞增殖无疑是至关重要的，为此我们从细胞增殖角度出发对浮萍和紫丹参进行了上述较为系统的研究，结果发现，两种中药合用
对黑素细胞促生长作用显著，且呈剂量依赖关系，但当浓度大于200μg／ml 培养基时其促 生长作用并未增加，而250μg／mI之下的浓度也在中医治疗的临床应用浓度范围之内，[10,11]，提示了应用的安全性。中医认为白癜风多为血气失和所致[10]，而浮萍性轻浮，入
肺经达皮肤，能增强体表循环。紫丹参人心经，为调和气血，活血祛瘀之要药。 现代药理研究表明二者合
用 可 扩 张 外 周 血 管 ， 促 进组 织修 复再 生 [12]。 其 对 白癜 风作 用 可能 通过 以
下 途径 进行 [10]：通过对郎罕氏细胞作用，参与调 节 免疫 反应 ， 阻 断免 疫 反 应 对 M C 的破 坏 ，改 善 受 损 细 胞 形 态 ， 直 接 促 进M C 的修复
和再 生 ，促 进 黑素 合 成 增加 ，促 进 白斑 周 围 黑素 细 胞 向 病灶 迁 移 ，中 和 或减 轻 毒 素反 应 ， 加 速 清除 免疫复 合
物 ， 降 低脂 质 氧化 酶 ， 升 高 超 氧化 物歧 化 酶 ， 提 高铜锌水 平等 起效 。 本 研究 从 细 胞水 平 首 次证 实 了 这 两种 中药
对 黑 素 细 胞 增 殖 的 直 接促 进 作 用 ， 为 临 床 中 药 治 疗 白癜 风 提供 了 实 验 依 据 ， 但 其 真 正 分 子 水平 的作
用 机 制 仍需 进 一步研 究 。 参 考 文 献 1 V an — d en — w ijn g aard ， R M I A ten J，S ch ee pm ak er A ， et a1． E x p ression an d m od u lat i o n o fap o p tos is reg u lato ry
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2003—09—13) |
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