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作者：上海市奉贤区中医医院检验科 苏春燕 案例疑惑 张某某，女，55岁，慢性肾炎，该病人是我院老病人，与我检验科也有“不解之缘”。2015年某日，来我检验科化验肾功能等项目，肌酐80μmol/L（参考值45-84μmol/L），由于之前该病人肌酐检测结果高于参考值，其对检测结果有异议。 我科采用的是雅培C16000全自动生化仪，试剂品牌是华臣，方法学是酶法，重新用奥林帕斯AU640检测，也是华臣试剂，结果为81.32μmol/L，并未发生多大改变。病人并未对结果满意，由于干化学的影响因素小，我决定用强生5600（酶法）检测，检测结果：156μmol/L（参考值58-110μmol/L）。最终造成病人的不解，同时也令我感到匪夷所思，湿化学与干化学之间的结果差这么多吗？在科主任的帮助下，该标本外送某三级医院，用湿化学再次检测，发现结果与我们的酶法检测并无多大变化。 从那之后每隔几个月她都会来医院化验，基本上肌酐的结果都高于正常值，前两天住院了，又来验肾功能，肌酐81μmol/L，又好了？我用干生化做了一遍198.8μmol/L，我心里又开始犯愁，到底为什么呢？之前读过某些文章说药物、还原物质对苦味酸法有影响，难道酶法也是？这次我一定要找到原因。 查找原因 经过对病人其他化验报告的查看，发现高肌酐的情况下尿常规中的维生素C呈阴性而正常肌酐时发现维生素C阳性。是不是它在干扰肌酐的检测呢？查看SOP、文献资料，发现胆红素、维生素C对肌酐有干扰，干扰的原理是Vc与4-氨基安替比林竟争H2O2，从而使紫红色的醌亚胺生成减弱，颜色变浅而发生干扰，随Vc含量的增加呈明显负增加。 问题又来了，湿化学和干化学之间的差异怎么会这么大呢？ 两者比较 强生干化学分析仪所使用的干片试剂由多层薄膜组成，第1层为分布扩散层， 能使标本均匀分布，过滤大分子，将溶血高血脂及胆红素等干扰减低至最低， 同时还提供反射测定的背景；第 2层为试剂层，包含干性试剂，控制反应顺序 ；第 3 层为指示剂层，包含染料以产生显色复合物。其独特的多层膜技术，不仅能掩盖待测物的有色物质并提供背景，还能选择性地阻留或去除干扰物，有效提高其抗干扰能力。 强生5600 系统测定 Crea浓度时，Crea扩散到试剂层水解为肌酸，通过肌酸脒基水解酶的作用，Crea转化为肌氨酸和尿素；肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下氧化为甘氨酸、甲醛和过氧化氢；最后通过一种无色染剂的过氧化物酶催化氧化作用产生一种有色物质；测量两个时间点上所产生的反射强度的变化，该反射强度差值与标本中的Crea浓度成正比 。 湿化学法： 基本概念：Trinder反应，又称“偶联终点比色法”，其原理为被测物质通过酶作用产生的过氧化氢（H2O2）在4—氨基替比林（4－AAP）、过氧化物酶（POD）的存在下，可生成红色醌亚胺化合物。 第一反应：标本中的肌酸在肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化氢酶的作用下被分解成水和氧。第二反应：标本中的肌酐在肌酐酶的作用下生成肌酸，肌酸在肌酸酶的作用下生成肌氨酸。肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下，生成的过氧化氢。过氧化物酶（POD）的作用下，使ESBmT与4-氨基安替匹林氧化缩合产生醌色素（紫红色），通过测定醌色素的吸光度，求出肌酐的浓度。 第一反应： 肌酸酶 肌酸+ H2O ———→ 肌氨酸 + 尿素 肌氨酸氧化酶 肌氨酸 + H2O —————→ 甘氨酸 + HCHO+ H2O2 过氧化氢酶 2H2O2 ————→ O2 + 2H2O 第二反应： 肌酐酶 肌酐+ H2O ———→ 肌酸 肌酸酶 肌酸 + H2O ———→ 肌氨酸 + 尿素 肌氨酸氧化酶 肌氨酸 + O2 +H2O —————→ 甘氨酸 + HCHO + H2O2 POD H2O2 + ESBmT + 4-氨基安替匹林 —→ 醌色素（紫红色） 结束语 小小的肌酐却有大大的学问。检验科虽然是基础部门，但它确是不可替代的，在平常的工作中我们应该发现问题、思考问题、总结问题，这样我们才能总结经验，避免不必要的矛盾，将它们运用到临床工作当中去，为医学事业添砖加瓦！ 检验视界网微信平台独家首发，转载请注明来源及作者！
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