看文献，学着用CRISPR烧钱

盆友，你会烧钱么？对，就是那种把钱哗哗滴花掉那种。不会的话没关系，看文献教你学用CRISPR烧钱。

有可能你觉得CRISPR还是离我们很远，但其实这个并不是很远，很多公司都有成熟的CRISPR的文库。文库是干嘛用的呢？就是用来烧的。这篇文献是发表在Cell Report上的，其实也不是很复杂，就是用CRISPR烧了一把

主要的内容其实是用CRISPR的文库，来筛选在白血病中的关键基因。可能你会比较难理解，为什么用CRISPR能筛选基因，其实很简单，首先把所有的基因片段变成sgRNA的文库，弄到慢病毒，整合上Cas9之类的CRISPR部件。因为是混合的慢病毒，所以这个就是CRISPR的文库，理论上是一个病毒敲除一个基因。你可以理解为有多少病毒，就敲多少基因了。

这个图就是秀一下文库质量的，实际上用这样的文库去感染细胞，调节到一定的MOI的话，就能使得单个病毒只感染单个细胞了。

那要怎么样来验证文库的效果呢？这个很简单，二代测序……因为感染病毒后，细胞理论上对单个基因进行了敲减，这样的话，如果是关键基因，那细胞就挂了，细胞如果挂了的话，通过慢病毒整合上去的sgRNA就也没了，那用二代测序去检测sgRNA的拷贝数，看看这些sgRNA什么时候耗尽，就知道感染了哪些基因的细胞死掉了。

你可能以为做一次二代测序就够了，哈哈哈，可能你还是太年轻了，这个根本不可能只做一次二代测序，为了验证sgRNA的耗尽时间，需要才用不同时间点的样本进行测序，这篇文献取了7天到25天间的7个时间节点，但是由于土豪作者选了5个白血病细胞系和2组对照，所以光二代测序就要做7×(5+2)=49次。

好吧，其实可能也没你们想象的那么贵啦。

接着就是对筛选出来的基因进行验证的过程（估计你们也不爱看，就省略了哈），虽然说这种方法可能费了蛮多钱，但是相对于普通的基因敲减而言，这个方法的通量会更高，更能筛到一些有价值的基因。好了，学会正确烧钱了的话，有条件的就去试试看哈。今天就先策到这里吧，祝你们心明眼亮。