本文涉及应用技术:均相时间分辨荧光(HTRF&TR-FRET)。来看研究人员是如何利用HTRF技术助推心血管疾病的研究的吧。 一氧化氮信号通路研究 2011年,Ramanathan等人在研究新发现的sCG抑制剂血栓反应蛋白-1(TH-1),这是一种与多种膜受体(包括CD47)结合的多结构域蛋白。他们对活细胞和细胞裂解物进行了HTRF cGMP检测,以评估在NO存在的情况下,各种情况对sGC活性的影响。结果表明,TH-1的E3CaG1片段与CD47结合时,抑制NO-sGC信号(图2.A)。在E3CaG1存在下,加入CD47抗体,NO-sGC信号增强(图2.B)。此外,E3CaG1与CD47结合引起细胞内钙离子增加,cGMP减少(图2.C)。 药物的发现 药物的高通量筛选 2017年,Jun Lee和Mahankali等人旨在识别可能显示出治疗效果的ApoC-III的小分子抑制剂。使用HTRF ApoC-III检测,他们筛选了超过95万种化合物,并确定了抑制率高于50%的化合物,并对其进行了进一步的研究(图4)。 结果显示,反式维甲酸(atRA)可能是有效的抑制剂。被认为是与两个受体家族相关(RARs和RXRs),作者进一步使用HTRF载脂蛋白分析来确定atRA对ApoC-III的影响仅是通过RARs介导的。 总的来说,对ApoC-III分泌的各种RAR受体激动剂进行了研究。AM580最有效的减少ApoC-III分泌,有效改善高脂饮食小鼠的体重、肝脏状况、心脏状况和甘油三酯水平。这些研究表明,一种RARα特异性激动剂可能为降脂和降低CVD风险提供了一种新的策略。 表征配体的功能研究--新开发抗β-Arestin受体配体 为了更好地和直接观察表达β-Arestin受体(βAR)的细胞和组织的生理和病理功能,Mitronova等人(2017)开发此类受体的荧光配体。用荧光基团标记已知的βAR拮抗剂卡唑洛尔和激动剂BI-167107,米特罗诺娃的团队进行了配体-受体结合实验和生物活性的分析。HTRF Tag-lite β1AR或 β2AR分析来确定解离常数(Kd),通过检测cAMP分析评估新配体的效力。 结语:该文章提供了HTRF技术在心血管相关研究的中的相关思路并得到验证的数据。为心血管疾病研究的道路“开辟捷径”,主要研究思路包括: 相关推荐:
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